摘要：目的评估多层螺旋CT(multi-spiralCT,MSCT)三维重建技术辅助下颈椎椎弓根螺钉植入的临床应用价值。方法取8具防腐处理颈椎标本,MSCT扫描后采集信息传送至工作站,根据下颈椎椎弓根植钉需求,进行容积成像(volume rendering,VR)以判断病情,多平面重组(multi-plannar reformation,MPR)行个体化分析,设计各个椎弓根螺钉的理想通道,测量相关参数。然后参照测量数据,分别在8具标本植入椎弓根螺钉。植钉完成后,再次对标本扫描,通过MPR对所植螺钉进行准确性评估。2007年5月-2009年11月,对28例行下颈椎椎弓根螺钉固定术患者,常规颈椎MSCT检查并行VR/MPR重建,评估病情,确定最短固定节段,采集目标椎弓根植钉数据。结果单枚螺钉植入时间为(392±62)s。植钉前测量除1个椎弓根闭锁(1.25%,1/80)、5个椎弓根冠状位直径0.05)。临床应用28例,术前测量发现1个目标椎弓根部分缺失、1个裂纹骨折,调整手术方案,术中共植钉121枚。术后17例(76枚)MSCT复查见67枚(88.16%)完全位于椎弓根内;9枚(11.84%)发生穿破,其中1级6枚(7.89%),2级3枚(3.95%)。结论MSCT三维重建技术可对下颈椎椎弓根固定理想钉道进行术前个体化准确测评,术中严格按照个体化参数植钉,可提高植钉的精确度和安全性;利用MPR图像对螺钉植入的准确性进行评价是可行的。

摘要：目的应用脊柱虚拟手术系统(spinal virtual surgery system,SVSS)进行脊柱胸腰段椎弓根钉固定术前设计,建立植钉相关参数测量的方法;通过对SVSS植钉相关参数与实际测量参数进行统计学分析比较,验证SVSS测量的准确性。方法取成人胸腰段脊柱标本8具(T11～L3椎体节段),先用SVSS进行椎弓根植钉术前设计和各椎体节段椎弓根左右两侧相关参数的测量,包括外展角(angle of axial view,Aa)、头倾角(angle of sagittal view,As)、入点横坐标(x-direction entrance,XE)、轴位面上测量的椎弓根轴线骨性通道全长(total pedicle length of axial view,TLa)、矢状位面上测量的椎弓根轴线骨性通道全长(total pedicle length of sagittal view,TLs)、椎弓根狭部皮质骨高度(pedicle height,PH)、椎弓根狭部皮质骨宽度(pedicle width,PW)、椎弓根狭部松质骨宽度(pedicle spongy width,PSW);然后完成尸体标本椎弓根植钉左右两侧相关参数的实际测量;最后进行虚拟植钉相关参数和实际植钉相关参数的统计学分析。结果虚拟测量(Aa、As、TLa、TLs、XE、PW、PSW、PH)和实际测量(Aa、As、TLa、XE、PW、PSW、PH)椎弓根左右两侧植钉的所有相关参数差异均无统计学意义(P>0.05)。除L3节段的XE及T11和T12节段的PSW的虚拟测量值与实际测量值比较差异有统计学意义(P0.05)。结论经过与实际测量参数进行统计学分析,验证了SVSS进行胸腰椎椎弓根钉固定术前设计的可行性和测量的准确性。

摘要：背景：骨组织工程支架材料中PDPB是一种较为理想的骨移植材料，目前多采用体外培养的骨髓基质干细胞与支架材料构建组织工程骨后修复骨缺损。目的：实验拟验证骨髓基质干细胞与PDPB体外构建组织工程骨的最佳浓度及移植入体内的最佳时机。设计．时间及地点：随机分组设计，对照观察，于2007—10／12在中国科学院动物研究所完成。材料：2周龄日本大耳兔，体质量2．0kg左右，用于培养骨髓基质干细胞。取新鲜的猪椎骨制备PDPB。方法：传代培养骨髓基质干细胞，矿化液对兔骨髓基质干细胞进行分化鉴定后，取不同浓度（1×10^10L^-1、5×10^9L^-1、1×10^9L^-1、5×10^8L^-1）的兔骨髓基质干细胞与PDPB复合体外构建组织工程骨。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞的生长形态：扫描电镜观察骨髓基质干细胞在PDPB上的黏附情况：四甲基偶氮唑盐法检测各浓度骨髓基质干细胞在PDPB上的生长情况。结果：①原代培养24h部分细胞开始贴壁，6d后贴壁生长的细胞数量增多，10--12d集落逐渐增大，并融合为单层。经矿化液诱导培养21d后，行矿化沉积茜素红染色及碱性磷酸酶细胞化学染色，可见大量细胞呈碱性磷酸酶阳性及大量钙结节形成。②扫描电镜观察骨髓基质干细胞在PDPB上黏附良好，第8天时细胞和材料结合紧密。第10天细胞呈梭形生长，部分细胞突起翘起。③各浓度组骨髓基质干细胞在PDPB上的生长曲线形态基本相同，呈“S”形。2-6d细胞开始在支架材料上大量增殖，第6天后细胞活力逐渐降低，其中5×10^9L^-1浓度骨髓基质干细胞复合PDPB后细胞可以很好的黏附，细胞活性好。结论：骨髓基质干细胞和PDPB复合的最佳浓度是5×10^9L^-1，移植的最佳时机为6d。

摘要：背景：异种生物骨经适当理化处理后的主要成分是羟基磷灰石，其生物降解性能差，常需要改性或与其他材料复合以加速其吸收，经改性后能很好地作为骨组织工程的支架材料。目的．观察双相陶瓷样生物骨的生物相容性及复合骨髓间充质干细胞移植的最佳时机。设计、时间及地点：观察性实验，于2007-01／06在昆明医学院生物医学工程研究中心完成。材料：将猪椎骨煮沸12h，经系列乙醇脱水后于800℃条件下煅烧6h后制得陶瓷化骨，完全去除有机成分，再将陶瓷化骨与适当浓度的焦磷酸钠溶液复合后于800℃煅烧1h，经缓慢冷却后制得双相陶瓷样生物骨。万法将双相陶瓷样生物骨材料植入成年日本大耳白兔双股部肌袋中，第2，4，8，12周时取材行常规组织学检测；同时将双相陶瓷样生物骨与取自2周龄日本大耳白兔的骨髓间充质干细胞体外复合培养，第2，4，6，8，10天时行MTT法测定及扫描电镜观察。王要观察摆际：植入双相陶瓷样生物骨后组织学观察：骨髓间充质干细胞在双相陶瓷样生物骨上黏附、增殖情况。结果。植入后动物切口愈合良好，肌肉纤维结缔组织及毛细血管由材料表面长入孔隙内，材料周围未见明显的淋巴细胞浸润，未见新骨形成。骨髓间充质干细胞附于双相陶瓷生物骨材料上生长增殖，细胞数量随培养时间增加，传代接种后第1～4天细胞增殖缓慢，于第5天细胞增殖加速，第8天时细胞增殖达稳定期，随后细胞增殖逐渐下降。结论双相陶瓷生物骨具有良好的生物相容性及细胞相容性，双相陶瓷生物骨材料复合骨髓间充质干细胞移植的最佳时机为体外复合培养第8天。

摘要：背景:天然异种骨采用适当的理化方法可将其抗原性削弱或消除,且能保留其天然的网状孔隙系统,从而使其结构和组成符合生理要求,可望作为一种骨移植替代材料。目的:采用传代的骨髓基质细胞与陶瓷样异种骨体外复合培养,以了解陶瓷样异种骨对兔骨髓基质细胞形态、生长、附着及增殖的影响。设计:空白对照实验。单位:昆明医学院第一附属医院中心实验室。材料:3个月龄日本大耳白兔5只,体质量1.5～2.0kg,雌雄不限。方法:实验于2003-06/10在昆明医学院第一附属医院中心实验室完成。取市售新鲜猪肋骨经理化处理制备陶瓷样异种骨,采用X射线衍射仪分析证实,其主要成分为羟基磷灰石;经扫描电镜观察证实该材料具有原骨组织的网状孔隙结构系统。取日本大耳白兔5只各抽取骨髓1mL,经PRMI1640培养液稀释制成骨髓基质细胞悬液,取上层细胞培养。以细胞1×106个/瓶,共接种25mL培养瓶8瓶,按1∶1比例传代,并将准备好的陶瓷样异种骨置入培养瓶内,每瓶置5块,共置5瓶,作为实验组,另3瓶(不置陶瓷样异种骨)作为对照组。2周后终止培养,取部分置入材料用于相差显微镜和扫描电镜观察。主要观察指标:相差显微镜和扫描电镜观察陶瓷样异种骨对骨髓基质细胞的形态特征、生长、附着及增殖的影响。结果:①兔骨髓基质细胞活体相差显微观察结果:原代培养:接种后10～14d细胞增殖连接成单层网状结构。传代培养:24h后完全贴壁,实验组与对照组的细胞皆生长良好。实验组陶瓷样异种骨周围的成纤维样细胞排列更密集。②兔骨髓基质细胞扫描电镜观察结果:实验组传代培养2周后可见一些连接呈网状的成纤维样细胞附于陶瓷样异种骨网状孔隙的内壁、孔底及骨小梁表面,细胞多呈梭形、三角形或多角形细胞。结论:陶瓷样异种骨主要成分为羟基磷灰石,且有原骨组织的网状孔隙结构系统,对骨髓基质细胞的形态、生长、附着及增殖均无不良影响,可望与骨髓复合移植修复骨缺损。

摘要：背景:股骨头缺血坏死的治疗是骨科领域的一大难题。然而,近来的研究表明碱性成纤维细胞生长因子是一有效的血管生成因子,推测其在股骨头缺血坏死的治疗方面可能具有一定潜能。目的:模拟临床上治疗股骨头坏死的开窗法的手术过程制备兔股骨头缺损,并植入碱性成纤维细胞生长因子和部分脱蛋白骨,以探讨碱性成纤维细胞生长因子对股骨头缺损的再血管化作用。设计:随机对照实验。单位:昆明医学院动物实验中心。材料:实验于2002-07/2003-07在昆明医学院动物实验中心完成。成年雄性健康新西兰白兔27只,体质量2.2～2.8kg。随机分为碱性成纤维细胞生长因子/部分脱蛋白骨复合骨组,单纯部分脱蛋白骨组,空白对照组,每组9只。方法:①制备碱性成纤维细胞生长因子/部分脱蛋白骨复合骨:含碱性成纤维细胞生长因子10ng/mm3载体。②股骨头缺损模型的建立及修复:取兔27只,在股骨头颈交界处开窗,建立骨缺损模型。复合骨组植入碱性成纤维细胞生长因子/部分脱蛋白骨;部分脱蛋白骨组植入单纯部分脱蛋白骨;空白对照组不植入任何植入物。实验动物分别于术后2,4,8周各时相点麻醉状态下进行墨汁灌注并处死,取材。主要观察指标:①兔股骨头标本组织学检查及血管计数。②微血管面积图像分析。结果:27只兔均进入结果分析。①兔股骨头标本组织学检查及血管计数:术后8周,复合骨组:移植材料被骨组织所取代,骨髓腔形成,其中有丰富的髓内血管存在;脱蛋白骨组:移植材料亦被骨样组织包裹,且大部分部分吸收;空白对照组:股骨头的缺损区被纤维组织填充,在缺损区周边的结缔组织中可见新生骨样组织和散在软骨细胞岛,血管数量较少。2周微血管计数复合骨组均显著高于部分脱蛋白骨组和空白对照组[(31.833±7.914)比(22.917±2.079)和(11.250±4.220)(血管数量/视野),P<0.01,P<0.05];4周和8周微血管计数复合骨组和脱蛋白骨组均显著高于空白对照组。②微血管面积图像分析:20μm厚的透明标本光镜下观察见:术后2,4,8周,复合骨组修复区血管丰富并吻合成网,部分脱蛋白骨组血管丰富吻合成网,空白组血管散在。结论:碱性成纤维细胞生长因子具有促进股骨头缺损的再血管化作用,其在治疗股骨头坏死方面具备一定的潜能和优势。

摘要：背景:碱性成纤维细胞生长因子对于创伤修复具有明显的促进作用,但局部应用难以持久地发挥作用。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染至兔骨髓间充质干细胞后的表达情况。设计、时间及地点:细胞基因学体外观察,于2009-03/08在云南大学生命科学院完成。材料:日本大耳白兔1只,购于昆明医学院动物科。pCDNA3.1质粒为美国Invitrogen产品。方法:抽取兔髂前上棘骨髓,采用贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,待细胞融合至培养瓶底80%时消化传代。参考GeneBank碱性成纤维细胞生长因子cDNA序列设计合成基因,电泳纯化后xholⅠ、BamHⅠ双酶切回收凝胶,以限制性核酸内切酶对PcDNA Vector质粒进行酶切、电泳和凝胶回收,连接碱性成纤维细胞生长因子DNA与PcDNA Vector质粒,构建pCDNA-碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体,运用脂质体转染法将重组体转染至兔骨髓间充质干细胞中,并筛选稳定转染株。主要观察指标:骨髓间充质干细胞表面抗原的表达,Western blot法检测目的蛋白的表达。结果:流式细胞仪检测结果示所培养细胞表面抗原呈CD90,CD44阳性,CD45呈阴性;免疫组化检测结果示骨髓间充质干细胞血管源性细胞表面抗原CD34呈阴性,而相对特异性标记物CD44呈阳性。转染碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞提取的细胞裂解液中,在Mr23000处有一条明显阳性杂交带;而转染pCDNA3.1(-)空载体的骨髓间充质干细胞提取蛋白未见阳性条带。结论:实验成功地将碱性成纤维细胞生长因子基因转染至兔骨髓间充质干细胞,该目的基因可稳定表达。

摘要：为挽救因动脉广泛病变所致严重缺血的肢体,设计了大隐动静脉和胫前动静脉直接转流的动物实验。结果表明:隐动静脉直接转流的术式是可行的。在此基础上应用于临床,采用股动脉—原位大隐静脉直接转流、选择性静脉瓣膜切除术,治疗下肢高位动脉闭塞14例(15条肢体),取得良好效果。

摘要：背景:有研究表明,糖尿病患者骨折愈合过程中局部骨形态发生蛋白2明显降低,成骨细胞增殖能力下降,骨折延迟愈合,或者不愈合。目的:观察骨形态发生蛋白2治疗糖尿病大鼠骨折愈合过程中骨痂组织成骨细胞增殖和骨钙素的表达,分析骨形成蛋白在糖尿病大鼠骨折愈合过程中的作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-09/12在昆明医学院动物实验中心完成。材料:SD雄性大鼠30只,20只腹腔内注射链脲佐菌素破坏胰岛细胞诱导为糖尿病大鼠后,随机均分为骨形态发生蛋白2组、模型对照组,另10只为正常对照大鼠,腹腔内注射等容量生理盐水。方法:3组大鼠行右胫骨上段骨折建立大鼠胫骨骨折模型。骨形态发生蛋白2组用10μg/kg骨形态发生蛋白2治疗,模型对照组及正常对照组给予等渗量生理盐水。主要观察指标:伤后第1,2,4,6周X射线片观察骨折愈合情况,光镜下观察骨痂内成骨细胞数量,放射免疫法测定血清骨钙素表达。结果:骨形态发生蛋白2、正常对照组X射线片显示骨痂生成量多,骨折愈合程度明显优于模型对照组(P<0.01)。骨形态发生蛋白2组成骨细胞数量明显多于模型对照组,略低于正常对照组。各组血清骨钙素均呈上升趋势,在第2周达到峰值,第4周下降,至第6周进一步下降。模型对照组骨钙素升高幅度明显低于正常对照组(P<0.01),并且低于骨形态发生蛋白2组。骨形态发生蛋白2组、正常对照组的骨钙素差异无显著性意义。结论:糖尿病大鼠骨折愈合过程中较正常大鼠,骨钙素水平降低,成骨细胞增殖下降,采用骨形态发生蛋白2治疗可提高骨钙素水平,促进成骨细胞增殖,促进骨折愈合。

摘要：背景:有研究表明,糖尿病患者骨折愈合过程中局部骨痂组织胰岛素样生长因子1明显降低,成骨细胞增殖能力下降。目的:观察以胰岛素样生长因子1治疗糖尿病大鼠骨折愈合过程中骨痂组织成骨细胞增殖和骨钙素表达,分析胰岛素样生长因子1在糖尿病大鼠骨折愈合过程中的作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-09/12在昆明医学院动物实验中心完成。材料:40只SD雄性大鼠,30只腹腔内注射链脲佐菌素破坏胰岛细胞诱导为糖尿病大鼠后,随机分为胰岛素样生长因子1组、胰岛素组、模型对照组,10只为正常对照大鼠,腹腔内注射等容量生理盐水。方法:4组大鼠右胫骨上段骨折后,胰岛素样生长因子1组用胰岛素样生长因子1治疗,30μg/kg,胰岛素组用胰岛素治疗,6～8U,模型对照组及正常对照组未进行治疗。主要观察指标:伤后第1,2,4,6周X射线片观察骨折愈合情况,光镜下观察骨痂内成骨细胞数量,免疫组织化学测定血清骨钙素表达。结果:胰岛素样生长因子1组、胰岛素组X射线片显示骨痂生成量多,骨折愈合程度明显优于模型对照组(P<0.05),胰岛素样生长因子1组、胰岛素组差异无显著性意义。光镜观察显示,胰岛素样生长因子1组、胰岛素组成骨细胞数量明显多于模型对照组,但低于正常对照组。各组血清骨钙素均呈上升趋势,在第2周达到峰值,第4周下降,至第6周进一步下降。模型对照组骨钙素升高幅度明显低于正常对照组(P<0.01),并且低于胰岛素样生长因子1组、胰岛素组。胰岛素样生长因子1组、胰岛素组、正常对照组的骨钙素差异无显著性意义。结论:糖尿病大鼠骨折愈合过程中,用胰岛素样生长因子1治疗可提高骨钙素水平,促进成骨细胞增殖,与胰岛素治疗效果相当。