摘要：目的观察应用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Survivin表达对细胞凋亡和细胞增殖的影响。方法设计、合成特异性抑制Survivin表达的siRNA，转染瘢痕疙瘩成纤维细胞，通过半定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）及Western blot检测24h和48h后成纤维细胞内Survivin mRNA和蛋白变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，噻唑蓝（MTF）测定成纤维细胞的增殖。结果重组质粒成功转染瘢痕成纤维细胞，转染效率为67．0％；阳性质粒转染24h后，Survivin mRNA和蛋白表达明显降低，抑制率分别为52．2％和54．8％（P〈0．05），48h后抑制率增至75．7％和76．7％。阳性质粒转染24h凋亡率为11．9％，48h增加至21．2％，显著高于阴性对照组和未处理组；细胞周期检测阳性质粒干扰组s期细胞减少，G2／M期所占比例增高，出现了G2／M期阻滞现象；MTF测定阳性质粒干扰组细胞生长曲线平缓。结论特异性siRNA可以有效干扰瘢痕疙瘩成纤维细胞内Survivin mRNA和蛋白的表达，诱导细胞的凋亡和抑制细胞的增殖。

摘要：舌骨下肌皮瓣是以甲状腺上动静脉为血管蒂的舌骨下肌肉组织皮瓣,1979年由王弘士等[1]设计并成功用于舌体再造,早期称之为带状肌皮瓣、舌骨下肌群肌皮瓣.随着基础解剖和临床应用的进一步研究发现,将胸锁乳突肌的胸骨头部分包含在组织瓣内有助于肌皮瓣的成活,于是在1987年更名为舌骨下肌皮瓣[2].因其具有质地柔软、组织薄、易塑形等优点而被广泛用于修复邻近的口腔颌面部组织缺损.

摘要：目的构建pSIREN-survivin/shRNA重组质粒并鉴定,为探索瘢痕疙瘩基因治疗的RNA干扰(RNAi)途径奠定基础。方法根据基因库survivin cDNA序列及Reynolds设计原则,设计并合成两端有酶切位点的65个碱基的寡核苷酸链,退火成互补双链后用T4DNA酶克隆至线性化的RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express质粒中;转化大肠杆菌DH-5a菌株,提取质粒行酶切鉴定,测序分析。结果 PCR扩增片断出现465 bp大小的目的基因条带与预期结果相符;双酶切见约65 bp目的基因条带;插入片断测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。结论成功构建重组质粒pSIREN-survivin/shRNA,为下一步用脂质体转染瘢痕或肿瘤细胞的研究奠定基础。

摘要：目的探讨hsp27基因对鼻咽癌细胞增殖的影响及其机制。方法利用实时定量PCR检测NP460(正常鼻咽部上皮细胞株)、CNE2(低分化鼻咽癌细胞株)及S18(CNE2的高转移亚克隆)的hsp27转录水平,利用慢病毒转染技术在hsp27转录水平较低的CNE2中过表达hsp27,利用小干扰RNA技术抑制S18细胞内的hsp27,用MTT技术检测过表达或抑制hsp27后细胞增殖速率的变化,同时检测转录因子NF-κB的转录水平的变化,分析hsp27影响鼻咽癌细胞增殖速率的可能机制。结果 (1)三种细胞株中的内源性hsp27水平为S18>CNE2>NP460,差异具有统计学意义。(2)在CNE2细胞中过表达hsp27基因后,细胞的增殖速率明显加快,NF-κB转录水平明显上调。(3)抑制S18细胞内的hsp27基因后,细胞的增殖速率明显减缓,NF-κB转录水平明显下调。结论 hsp27基因可能通过调节NF-κB信号通路而对鼻咽癌细胞发挥明显的促增殖作用,可设计针对hsp27基因的抗鼻咽癌分子治疗策略。

摘要：目的构建并鉴定靶向果蝇同源蛋白3(tribbles-related protein 3,Trb3)基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并检测其对靶基因的沉默效应。方法根据Genbank数据库中Trb3序列,设计、合成3对互补并特异性编码其shRNA序列的寡核苷酸,克隆到线性化的***质粒载体中,并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定;脂质体介导重组质粒和*** Vector转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株,RT-PCR和Western-Blot检测其对靶基因Trb3的表达影响。结果酶切及测序鉴定重组质粒***-shTrb3序列正确;转染重组质粒后舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中Trb3 mRNA和蛋白表达水平相对于空载体组明显下降,shRNA可以特异性沉默Trb3基因。结论成功构建了靶向人Trb3基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究Trb3在舌鳞状细胞癌和其他头颈肿瘤中的作用奠定了基础。