摘要：为建立一套表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒反应器工艺,提高反应器上猪瘟病毒E2蛋白的表达量,以商业化培养基为基础,通过对关键营养组分添加量的DOE试验设计优化,获得一种组合补料配方,并在3 L反应器上对补料方式进行优化,以最大限度提高细胞密度。进一步在反应器上摸索了通气策略,以精确调控猪瘟E2重组杆状病毒培养过程的营养代谢平衡,解决副产物乳酸和氨过度积累导致细胞活力下降的问题。首次使用半连续补料工艺与渗透压动态平衡相结合的补料策略以及定向调节通气的工艺模式,使猪瘟病毒E2蛋白的表达量由130 mg/L增加至520 mg/L,提高了3倍。将3 L反应器工艺在100 L反应器上进行了连续3个批次的验证,结果猪瘟病毒E2蛋白的表达量均大于500 mg/L,收获猪瘟E2蛋白制备的疫苗抗体均在2周后转阳,且抗体水平持续上升,接种后8周抗体阻断率仍维持在80%左右。综上,3 L反应器工艺能够稳定放大至100 L反应器,建立了表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒100 L反应器工艺,且100 L反应器上重组蛋白的表达量稳定、免疫原性良好。

摘要：为建立用于传染性法氏囊病病毒(IBDV)和禽致病性大肠杆菌混合感染快速鉴别检测的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,研究分别根据IBDV VP2基因和大肠杆菌UidA基因设计合成特异性引物和探针,通过普通PCR方法扩增目的基因片段并克隆至pGM-T载体,构建重组质粒pGM-T/VP2和pGM-T/UidA作为标准品,通过正交试验确定引物和探针的最佳浓度,分别建立基于VP2和UidA基因的标准扩增曲线,并进一步验证其特异性、灵敏性、重复性,建立的方法应用于人工感染样本和临床样本的检测,并与常规PCR方法进行比较。结果显示:VP2和UidA基因的最佳上、下游引物浓度均为0.30μmol/L,VP2和UidA基因的探针浓度分别为0.35μmol/L和0.25μmol/L;VP2和UidA基因扩增的线性范围均为10^(3)~10^(7)拷贝/μL,相关系数R2≥0.99,灵敏度均为100拷贝/μL;两者组间及组内变异系数均小于2%;人工感染样品与临床样品的检测结果与普通PCR方法一致。研究表明,建立的二重探针FQ-PCR方法为同时检测IBDV和禽致病性大肠杆菌提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。

摘要：鸭细小病毒(Duck parvovirus,MDPV)是细小病毒科依赖病毒属成员。为建立鸭细小病毒(MDPV)快速、便捷、准确、灵敏度高的实时荧光LAMP检测方法,针对鸭细小病毒基因组中相对保守的特异区域设计LAMP引物组,用灭活后的病毒血清样本直接扩增,筛选出一套最优引物组并做特异性和灵敏度实验。结果表明,该引物组特异性扩增鸭细小病毒,对相似的其他病毒和衣原体检测结果为阴性;将模板10倍比例稀释后检测结果限线性范围达6个数量级,检测下限为2 copies,证明该技术方法可应用于鸭细小病毒现场快速检测。

摘要：目前，对病毒性疾病的主要控制手段仍为疫苗免疫，因此，如何做好免疫工作就显得尤为重要，现介绍如下。一、主要流行疾病的免疫（一）新城疫的免疫设计鸡新城疫免疫程序要考虑的重点日龄是育雏期：

摘要：为同步检测引起奶牛流产的新孢子虫、布氏杆菌和弓形虫这三种常见病原,本研究分别设计针对新孢子虫ITS1基因(Nc-ITS1)、布氏杆菌16S rRNA基因(Ba-16S rRNA)及弓形虫529 bp重复序列基因(Tg-529 bp)的特异性巢式PCR引物,建立并优化了能够同时检测这三种病原的多重巢式PCR方法。结果显示,多重巢式PCR对Nc-ITS1、Ba-16S rRNA及Tg-529 bp扩增产物的大小分别为601 bp、380 bp、245 bp。外引物退火温度为57℃,内引物为53℃;Taq酶、dNTP和Mg2+浓度分别为1.0 U、2.0 mmol/L和1.0 mmol/L;Nc-ITS1和Tg-529 bp外、内引物浓度均为0.4 m ol/L,Ba-16S rRNA为0.2 mol/L。该多重巢式PCR对Nc-ITS1和Ba-16S rRNA检测敏感性达3×102 copies/L,对Tg-529 bp达3×101 copies/L,对住肉孢子虫、大肠杆菌、沙门菌、李氏杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌扩增均无目的条带,表明该多重巢式PCR方法具有良好的敏感性和特异性。利用该方法对86份临床样品进行检测,结果显示新孢子虫阳性样品26份,布氏杆菌阳性样品2份,弓形虫阳性样品1份,其中新孢子虫和布氏杆菌均为阳性的样品1份,与单巢式PCR检测结果一致。结果表明,建立的多重巢式PCR方法可以用来对致奶牛流产的新孢子虫、布氏杆菌和弓形虫这三种常见病原进行快速、准确地检测。

摘要：我国已经在大规模高生物安全风险车间的设计和建设领域取得了丰富的工程实践经验,并逐步完成了对发达国家的追跑和并跑,在部分领域处于相对领先状态。但由于消防、生物安全等领域关注点的差异,以及动物、人用产品的不同要求,导致不同领域防烟排烟的设计理念存在差异,对大规模高生物安全风险车间建设的进一步提升存在影响。本文通过对国内外生物安全设施(生产车间和实验室)相关规范和标准中对生物安全和消防关切要点的梳理与凝练,结合对实际工程案例的分析和总结,系统性地阐述了我国大规模高生物安全风险车间防烟排烟设计的相关要求,对防火分区划分、排烟系统、70℃防火阀和排烟防火阀设置等关键环节的设计进行重点讨论,并提出了针对性解决方案,为相关国家规范标准的编制(修订)提供建议,为同类项目的实施提供参考。

摘要：通过对山东某规模化猪场一起混合感染引起疫情的病原检测分析发现,疫情主要是蓝耳病病毒、猪瘟病毒和胸膜肺炎放线杆菌混合感染引起;同时根据抗体水平的检测发现,仔猪、肥育猪蓝耳病、猪瘟免疫抗体水平合格率偏低,且离散度大,说明该猪场免疫程序存在设计缺陷。由于该猪场疫情属于混合感染,进行防控时应从猪场整体考虑制定综合防制措施。

摘要：根据GenBank已经公布的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE全基因序列,设计合成了1对引物,利用PCR技术对猪伪狂犬病河南原阳病毒株相关的毒力基因gE进行了扩增,将特异性DNA条带进行回收,回收的PCR产物克隆到pMD?18-T载体中,并转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞。运用蓝白斑筛选,挑取阳性菌落,提取重组质粒进行PCR、酶切和测序鉴定。测序结果表明,该序列全长为1 862 bp,将该基因核苷酸序列与从GenBank下载读取的马来西亚株(FJ176390)、爱尔兰Nia-1株(FJ605136)、湖北Ea株、韩国株(AY249861)、美国Becker株(AY368490)、广东SH株(EF55242 7)、西班牙株(EU502923)、河南焦作株(EU561349)等的gE基因进行同源性分析比较,得出的核苷酸同源性分别为99.4%、97.9%、99.7%、99.6%、98.0%、99.7%、97.8%、99.0%。通过对其序列进行的测定,有利于进一步从分子水平研究PRV在某些地区的流行、变异规律,也为PRV的诊断和预防奠定了基础。