摘要：目的 设计并评价9条VEGF siRNA的干扰效果，并提出新的高效siRNA设计规则。方法 用siRNA现有设计规则与计算机辅助结合共设计9条VEGF siRNA序列，长度为19 bp。体外转录法构建9条VEGF siRNA，通过脂质体介导转染神经胶质瘤U251细胞株，培养48 h，用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的表达量，分析9条VEGFsiRNA序列特征与其干扰效果的关系。结果 用“H-b”指数可以量化VEGF mRNA二级结构；VEGF蛋白表达的抑制程度与“H-b”指数呈负相关（r=-0.498），靶向VEGF mRNA第386～406位置核苷酸的siRNA和第401～421位置核苷酸的siRNA的“H-b”指数小，抑制蛋白表达的效果好。siRNA正义链的第19个核苷酸碱基为A/U，且第6个核苷酸碱基为A，有较好的沉默靶基因的效果。siRNA的热动力学特征也影响其干扰效果，反义链第9～14位置的内部能量稳定性的均值（AIS）大，易于发挥干扰效果；siRNA反义链的结合能量越低，siRNA反义链与靶序列mRNA结合越稳定，有利于RNA诱导的沉默复合物（RISC）剪切靶序列mRNA。结论 成功地设计并合成VEGFsiRNA序列，能有效地抑制VEGF蛋白表达。

摘要：目的研究小干扰RNA(siRNA)对bcl-2基因表达的抑制作用。方法利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl-2基因为靶标的siRNA,通过脂质体将合成的siRNA转入A549和NCIH460细胞株,以未转染细胞和转染bcl2的反义药物G3139为对照,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制,RTPCR检测bcl2mRNA水平,流式细胞仪检测细胞周期的改变和bcl-2蛋白表达,反应siRNA对bcl-2表达的抑制效应。结果siRNA组与对照组细胞存活率各时间点均有显著差异(P0.05)。转染12h后,siRNA组bcl-2mRNA与对照组和反义组有显著差异(P<0.05)。转染48h后,siRNA组bcl2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组和反义组细胞阻滞于S期。结论体外转录合成的siRNA可抑制A549和NCIH46细胞bcl2基因的表达,效率可达50%以上。

摘要：目的 :试图用计算机设计并筛选出血管内皮生长因子 (VEGF)的高效反义核酸 ;用实验方法研究VEGF反义核酸对K5 6 2细胞增殖的影响。方法 :用RNAstructure (version 3.7)软件 ,选择总自由能 (overall△G3 7)相对低的反义核酸 ,共计 7条 ,长度 18- 2 0核苷酸 ,全硫代修饰 ;细胞培养 72h ,采用台盼蓝拒染法观察存活细胞 ,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平 ,分析反义核酸对K5 6 2细胞的作用。结果 :筛选出 6条反义药物对K5 6 2细胞生长有明显抑制作用 ,均优于阳性对照组 (X2 )。与随机对照组 (X1)相比 ,最优序列X7组细胞生长抑制率达31 9%、培养液中VEGF蛋白表达抑制率达 5 1.4 % ,overall△G3 7与反义药物活性密切相关 (r=0 887,P <0 0 1)。结论 :计算机辅助设计有助于获得更好反义药物 ,VEGF反义药物可抑制K5 6 2细胞生长及VEGF蛋白表达 ,内源性VEGF蛋白具有促进K5 6

摘要：目的:探讨VEGFsiRNA对肝癌SMMC7721细胞株VEGF表达和增殖的抑制作用。方法:采用siRNA设计法则并用计算机辅助设计9条VEGFsiRNA序列,长度为19个核苷酸;体外构建9条VEGFsiRNA序列,通过脂质体介导转入肝癌SMMC7721细胞株,培养72h,采用CCK8试验分析VEGFsiRNA(25nmol/L)对细胞增殖的抑制效果,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:VEGFsiRNA1-VEGFsiRNA9序列对肝癌细胞的增殖有明显抑制作用,与脂质体对照组和空白对照组相比均有显著差异(P<0·05);其中,VEGFsiR-NA2、VEGFsiRNA4、VEGFsiRNA6、VEGFsiRNA7、VEGFsiRNA8、VEGFsiRNA9对细胞增殖的抑制效果均强于反义寡核苷酸组。VEGFsiRNA1-VEGFsiRNA9序列均能下调肝癌细胞VEGF蛋白的表达水平,以VEGFsiRNA7和VEGFsiR-NA2的效果最强,抑制率分别为52·65%和50·43%。VEGFsiRNA将肝癌细胞阻滞在S期,但未引起细胞凋亡现象。结论:成功地设计和合成VEGFsiRNA。后者能有效地抑制肝癌细胞的增殖,降低VEGF蛋白的表达量。

摘要：目的用RNAstrueture软件设计和实验分析来筛选有效的反义核酸。方法选择Bel-2基因为靶基因,利用RNAstrueture软件,模拟Bcl-2mRNA的二级结构,根据自由能不稳定区域或者无折叠的区域,设计5条反义核酸序列,研究它们对白血病细胞的细胞生长作用,用免疫组织化学和流式细胞技术研究蛋白的表达,RT-PCR检测mRNA的含量,有细胞形态学方法、电泳和流式细胞技术检测细胞凋亡。结果5条中有两条反义核酸能显著抑制白血病细胞的生长,降低Bcl-2mRNA和蛋白水平,显著诱导细胞凋亡。结论计算机软件预测有效反义比其他方法快而有效,这种方法能有效加速研究和临床反义序列的设计。

摘要：目的　通过计算机模拟bcl 2基因的mRNA二级结构 ,优化反义药物设计。方法　用计算机程序Mfold软件模拟mRNA的二级结构后 ,筛选出不稳定的二级结构区域 ,进行反义药物设计 ;用实验评价所设计反义药物的生物效应 ,筛选出的bcl 2反义寡核苷酸对白血病细胞株HL 60、K5 62生物学活性的影响。结果　有 2个位点的反义寡核苷酸在计量为 10 μmol·L-1以上时 ,能明显抑制细胞的生长活性。结论　bcl

摘要：目的 :研究siRNA(smallinterferenceRNA)对bcl- 2基因表达的抑制作用。方法 :依据Ambion公司在网上提供的设计软件 ,设计合成以bcl- 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入U2 5 1细胞株 ,以未转染细胞以及bcl- 2的反义药物G3139为对照 ,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制以及流式细胞仪检测细胞周期的改变 ,用RT -PCR和免疫组织化学法检测siRNA对bcl- 2表达的抑制作用。结果 :MTT显示各时点细胞生长以及存活率 ,在siRNA 2、3、5、6与siRNA 1、4组以及对照组和脂质体组间均有显著差异 (P 0 0 5 )。RT -PCR以及免疫组织化学法显示 ,siRNA 2、3、5、6组bcl- 2基因表达明显低于对照组、脂质体组、反义组以及siRNA 1、4组 (P <0 0 5 )。流式细胞仪检测细胞周期结果显示 ,siRNA 1- 6组以及反义组细胞阻滞于S期。结论 :体外转录合成的siRNA可抑制U2 5 1细胞bcl- 2基因的表达 ,效率可达 5 0 %以上。

摘要：靶向识别特异抗原的嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞）已成为治疗恶性血液病的有效手段.临床研究涉及多种多样的CAR设计、不同的生产工艺及研究群体等.CAR-T细胞治疗慢性淋巴细胞白血病（CLL）和急性淋巴细胞白血病（ALL）已取得了令人瞩目的疗效,这将有可能改变所有类型血液系统恶性肿瘤的治疗模式.第56届美国血液学会（ASH）年会中关于CAR-T细胞的研究结果鼓舞了人们对这类新型治疗策略的信心.文章介绍CAR-T细胞治疗的临床研究结果和应用前景.虽然CAR-T细胞治疗恶性血液病还存在着许多有待解决的问题,但其治疗的高反应率促使开展了更多的临床研究.

摘要：目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和Bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组Bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。

摘要：背景:成纤维生长因子可促进间充质干细胞增殖、贴壁生长,但对其诱导间充质干细胞向肝细胞分化的实验报道为数不多。当肝细胞生长因子质量浓度达1μg/L时,可促进肝细胞有丝分裂,它是正常肝细胞最强的促有丝分裂剂。目的:体外分离培养人脐带间充质干细胞,拟揭示其生物学特性及在细胞因子联合诱导下向肝样细胞分化的能力。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08/2009-04在暨南大学血研所完成。材料:脐带取自健康足月胎儿,产妇对实验知情同意,由广州华侨医院提供。肝细胞生长因子、成纤维生长因子为美国Peprotech产品。方法:Ⅳ型胶原酶消化+差速贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞,取传至第3代细胞,进行细胞表面抗原分析、细胞周期测定,检测其成脂、成骨能力。取第5代细胞,调整细胞密度为5×109L-1,分为2组:对照组用含体积分数为5%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养;诱导组在其基础上,添加20μg/L肝细胞生长因子、10μg/L成纤维生长因子联合诱导其向肝样细胞分化。主要观察指标:人脐带间充质干细胞的生物学特性,人脐带间充质干细胞体外向肝样细胞的分化情况。结果:成功从人脐带中分离并纯化得到间充质干细胞,第3代细胞92.2%处在G0/G1期;表达CD29,CD44,CD105,不表达造血细胞标志CD34,CD45;油红O染色后胞浆中呈现红色颗粒,碱性磷酸酶染色后细胞质呈黑色,具有成脂、成骨能力。经肝细胞生长因子、成纤维生长因子联合诱导10d后,RT-PCR及Westernblot检测结果显示细胞表达肝细胞特异性抗原甲胎蛋白、白蛋白,对照组均呈阴性表达。结论:人脐带中含有丰富的间充质干细胞,其具有较强的多向分化潜能,经肝细胞生长因子与成纤维生长因子联合诱导后,易向肝样细胞分化。