摘要：干扰素调节因子6(interferon regulatory factor 6,IRF6)基因突变在单纯型和综合征型唇腭裂中均有报导。然而,其基因突变如何导致了唇腭裂的病理发生目前尚不清楚。本文以培养细胞为模型,研究了IRF6基因沉默对细胞增殖、迁移、凋亡以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,从而探讨唇腭裂形成的可能的分子病理机制。采用分子克隆技术构建IRF6真核过表达载体;设计合成IRF6基因特异siRNA,成功构建IRF6基因沉默和过表达细胞模型;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)检测转染siRNA-IRF6质粒48 h时,发现IRF6的mRNA和蛋白质表达均降低2倍;CCK8法检测转染siRNA-IRF6后,对细胞增殖能力提高1.98倍;划痕法观察转染siRNA-IRF6质粒72 h后检测细胞的迁移能力,比对照组增强2.36倍;利用Western印迹、qRT-PCR检测EMT标志性分子E-钙黏着蛋白(E-cadherin),发现过表达IRF6后EMT有显著降低。与对照相比,E-钙黏着蛋白表达下调3.57倍;流式细胞技术检测IRF6时未发现对细胞凋亡有影响。在体外培养细胞模型中,IRF6基因沉默显著促进了细胞的增殖和迁移,抑制EMT发生。提示IRF6这一唇腭裂相关基因有可能通过影响上述细胞事件,而导致唇腭裂的病理发生。

摘要：根据天蚕抗菌肽A(cecropinA ,CA)N端第 1～ 7个氨基酸残基、蜂毒素 (melittin ,M )N端第 5～ 12个氨基酸残基 ,以大肠杆菌偏爱的密码子设计合成了杂合肽CA(1～ 7) -M(5～ 12 )基因 ,同载体 pGEMEX - 1连接后转化大肠杆菌JM 10 9,经打点杂交筛选和序列测定 ,获得一个与设计一致的克隆。将此克隆中的质粒亚克隆至JM10 3(DE3) ,经IPTG诱导、BrCN切割和抑菌圈试验表明 ,克隆的杂合肽基因在JM 10 9(DE3)中获得了表达。

摘要：目的克隆刺苋花粉中Profilin蛋白基因，分析同源序列中不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献。方法基于生物信息学分析已知泛过敏原Profilin的氨基酸序列并获得核心代表序列，以之为基础设计合成引物，采用Touchdown PCR技术从刺苋花粉的eDNA池中进行基因克隆，并经菌落PCR和双酶切验证；采用生物信息学软件MULTIPRED及SWISS-MODEL在线软件对所得基因编码蛋白进行抗原性评估及三级结构模拟。结果从刺苋中获得两个序列不同的泛过敏原基因，分别命名为PRF7和PRF23。蛋白质三级结构显示：PRF7与已知的泛过敏原Profilin存在少数氨基酸的差异，其空间结构与抗原性没有明显变化；而PRF23与北方豚草花粉泛过敏原Q64LH0之间相似程度较低，而空间结构也呈现明显的差异；尽管Q64LH0与PRF23的全序列抗原性均值差异无统计学意义，受一些区段上不同性质的氨基酸改变的影响，PRF23在这些区段上的抗原性显著低于Q64LH0的抗原性。结论基于Q64LH0和PRF23同源氨基酸序列的抗原性评估及三级结构分析，获得了不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献等信息，映射了南方花粉过敏症发生率较低的原因所在，也为过敏原遗传改良过程中进行氨基酸置换指明了方向。

摘要：M1RNA是 ***体内一种具有催化活性的 RNA分子 ,能特异性的切割靶 RNA分子 ,可用来抑制基因的表达。由 M1RNA发展而来的 M1GS是一种潜在的基因治疗药物 。