摘要：背景:目前,尚未在体外环境中构建出与正常气管软骨生物学和机械特性相似的组织工程化气管软骨。目的:测定体外和体内培养环境中软骨细胞-DegraPol支架复合物的机械力学值,探讨提高管状组织工程软骨力学适应性的培养方法。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-12/2008-02在深圳市人民医院医学研究中心完成。材料:分离培养2周龄SD幼鼠的剑突软骨细胞及肌成纤维细胞,分别接种DegraPol管状支架上,制备软骨细胞-支架复合物及肌成纤维细胞-支架复合物,以空白支架为对照。方法:将3组支架在2种培养条件下培养:①体外静态培养3周和6周。②体外培养3d后置于同系大鼠体内大网膜包裹1,2和6周。主要观察指标:体外/体内培养条件下的软骨细胞-支架复合物的机械力学强度。结果:体外培养条件下,最大应力和应变值培养6周者低于培养3周(P<0.05),软骨细胞-支架组的支架最大应力值和应变值高于其他2组(P<0.05)。体内培养条件下,3组最大应力值随培养时间延长而增加,培养6周的数值均高于培养1周,软骨细胞-支架组最大应力值高于其他2组(P<0.05);3组最大应变值随培养时间延长而降低,培养6周的数值均低于培养1周(P<0.05)。无论体内还是体外培养获得的组织工程软骨的生物力学强度均远远低于正常大鼠气管软骨。结论:体内培养方式有利于提高工程化组织的力学强度,但单纯静态体外培养或者体内培养获得的软骨细胞-支架复合物力学强度尚不能用于原位气管移植。

摘要：前期实验已证实人气管软骨细胞在DegraPol片状支架上保持了正常的形态和活力，同时分泌软骨特有基质成分。目的：以大鼠剑突软骨细胞为种子细胞种植于DegraPol管状泡沫支架，观察新形成的工程化组织在体外静态培养条件下的组织和力学特点。设计、时间及地点：单一样本观察，于2006-12／2008-02在深圳市人民医院医学研究中心完成。材料：DegraPol管状材料为瑞士联邦理工大学聚合材料研究所提供；实验动物为2周龄体质量50-60g的SPF级SD幼鼠。方法：收集第3代幼鼠剑突软骨细胞接种于DegraPol管状支架，形成软骨细胞-支架复合物，体外静态培养6周。主要观察指标：①AO／PI荧光染色观察软骨细胞在DegraPol管状泡沫支架中的存活情况，于培养3，6周取出软骨细胞-DegraPol支架复合体，MTT法测定细胞增殖情况。②培养3，6周，应力-应变机械力学方法测定最大应变和应力的变化。③培养3，6周，扫描电镜观察软骨细胞在DegraPol支架中培养后的超微结构。结果：①AO／PI荧光染色显示软骨细胞在DegraPol支架内保持良好的活性，MTT法结果显示培养6周组A值高于培养3周组（P〈0．05）。②应力-应变机械力学测定结果显示，培养3周组应力值和应变值高于培养6周组（P〈0．05）。③扫描电镜结果显示DegraPol支架与大鼠剑突软骨细胞有良好的生物相容性，培养6周后获得更多的软骨细胞增殖和更多的细胞外基质。结论：DegraPol管状泡沫支架有良好的生物相容性并且软骨细胞在支架上保持正常活性，但由于工程化复合物的生物力学强度较差，培养条件和培养方式有待进一步改善。

摘要：背景:通常采用阿辛蓝染色技术鉴定软骨组织,然而对于组织工程软骨形成早期,阿辛蓝染色不能很好的显示细胞外基质的分泌情况。目的:拟观察采用免疫组织化学法S-100抗原结合α-肌动蛋白抗原染色鉴别人工合成组织工程化软骨结构的可行性。设计、时间及地点:对比观察,于2006-12/2008-02在深圳市人民医院临床医学研究中心完成。材料:2周龄SPF级SD大鼠,体质量50～60g,用于体外培养剑突软骨细胞;DegraPol材料,长20mm,内/外径分别为2.5/4mm,管壁厚度为0.75mm,由瑞士联邦理工大学聚合材料研究所提供。方法:于第3代收集软骨细胞接种于DegraPol管状支架形成软骨细胞-支架复合物,体外培养3周后植入同系大鼠腹腔大网膜体内培养1周。分别于体外培养3周和体内培养1周后取软骨细胞-DegraPol复合物制备组织学检测标本行苏木精-伊红染色和S-100抗原、α-肌动蛋白抗体免疫组织化学染色。主要观察指标:倒置显微镜观察软骨细胞-DegraPol复合物的变化;免疫组织化学染色鉴定软骨细胞。结果:体外培养3周后,苏木精-伊红染色显示软骨细胞位于软骨陷窝内,软骨基质呈蓝色。种植软骨细胞于DegraPol管状泡沫材料支架内侧面,体外培养3周后,在管腔的内侧壁S-100抗原阳性表达,α-肌动蛋白抗原阴性。证实在细胞-支架复合物植入同系大鼠体内培养之前已经形成了新的组织工程化软骨层。置入动物体内培养1周后,所获得的新组织为混合性的细胞结构,S-100抗原阳性多集中在管腔的内侧壁,而α-肌动蛋白抗原阳性反应多集中在管腔的外侧壁。结论:软骨组织S-100抗原阳性表达,结缔组织α-肌动蛋白抗原阳性表达,S-100和α-肌动蛋白抗原可作为组织工程化软骨的鉴定指标。

摘要：背景:急性排斥反应的发病机制主要是T细胞介导的免疫应答,Th1,Th2细胞及其分泌的细胞因子互相调节、交叉作用在其中起重要作用。研究表明,原始Th细胞向Th1或Th2细胞分化受转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的表达所调控。目的:在前期实验基础上,应用实时荧光定量聚合酶链反应法测定大鼠移植肺组织中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的mRNA表达,初步分析转录因子T-bet和GATA结合蛋白3在肺移植急性排斥反应中的作用及其意义。设计、时间及地点:单一样本观察的随机对照动物实验,于2003-08/2008-04在瑞士苏黎世大学医院胸外科实验室和深圳市人民医院临床研究中心完成。材料:纳入LBNF1大鼠10只和Lewis大鼠30只,以建立大鼠左侧原位肺移植模型。方法:将大鼠按随机数字表法分为5组,以肺移植后3,5d作为观察急性排斥反应的时间点:①空白对照组(n=5):取正常Lewis大鼠左肺组织。②冷缺血对照组(n=5):冷低钾右旋糖酐液灌注后取Lewis大鼠右侧肺组织。③同系移植组(n=5):Lewis→Lewis大鼠肺移植后5d,取移植左肺组织。④同种异体移植3d组(n=4):LBNF1→Lewis大鼠肺移植后3d,取移植左肺组织。⑤同种异体移植5d组(n=6):LBNF1→Lewis大鼠肺移植后5d,取移植左肺组织。主要观察指标:应用实时荧光聚合酶链反应法,定量检测各组大鼠肺组织中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的表达。结果:①T-bet在同种异体移植5d组中的表达有所增高,但与其他各组间差异均无显著性意义(P>0.05)。②GATA结合蛋白3在同种异体移植5d组中的表达水平低于空白对照组、冷缺血对照组及同系移植组(P0.05)。结论:移植肺组织中GATA结合蛋白3比T-bet的改变更敏感,起主导作用;T-bet/GATA结合蛋白3比值可作为评价肺移植急性排斥反应的客观指标之一。