摘要：利用CRISPR/Cas9和ES细胞技术,在小鼠ES细胞株上敲除小鼠H2-K1基因,为研发MHCⅠ类基因人源化小鼠打下基础。设计了两个单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),分别靶向H2-K1基因的外显子2和外显子3。以p X330质粒为骨架构建表达sgRNA的打靶载体。用电穿孔转染法将构建好的质粒以及p SUPER-puro共同导入小鼠ES细胞中,实现基因敲除。在嘌呤霉素筛选后,利用PCR初步检测靶基因的敲除情况,再通过测序以及流式细胞分析确定敲除H2-K1基因的小鼠ES细胞。结果显示:利用CRISPR/Cas9技术,小鼠ES细胞的H2-K1基因被成功敲除,通过PCR检测到4个克隆为H2-K1单等位基因敲除(19.0%),2个克隆为H2-K1双等位基因敲除(9.5%)。经过测序以及流式细胞分析,2株小鼠ES细胞被确认为H2-K1双等位基因敲除。本研究利用CRISPR/Cas9技术得到H2-K1基因敲除的小鼠ES细胞株,为MHCⅠ类基因的敲除和置换提供了参考。

摘要：目的:为适应肺功能检测仪检测校正的要求,设计并制作一款可产生模拟人体呼吸标准曲线并自动对肺功能仪作检测分析的智能肺功能仪检测校正系统。方法:系统的建立采用计算机智能操控伺服电机驱动的活塞气缸方式。结果:有关执行和应用检测结果表明,此系统可精准输出美国胸科协会推荐的24条标准用力肺活量及26条最大呼气流量波形曲线,还可提供被检测肺功能仪的详细数据。结论:本研究的智能肺功能仪检测校正系统可适用于智能测定分析被检测校正的肺功能仪的准确度和频率速度响应等情况,并可有助于医生对肺功能仪所测定的病人肺功能状况的数据指标作情况分析。