摘要：目的研究白念珠菌菌丝相和酵母相细胞ERG11基因碱基序列上的差异,探讨两相细胞之间的差异性。方法分别抽提从同一HIV阳性患者体内分离到的7株对氟康唑敏感程度不同的白念珠菌菌丝相和酵母相的DNA,此系白念珠菌经染色体水平及DNA水平证实来源于同一亲本。根据ERG11编码序列设计一对引物,对ERG11的近3'端的310bp的碱基序列进行PCR扩增,引物序列为:上游引物5'-GGGAAAGTTTCTAAAGGGG-3';下游引物5'-TATGTTAATCCAACTAAGTAA-3'。经PCR产物直接测序比较两相细胞ERG11基因碱基序列上的差异。结果1株氟康唑剂量依赖性敏感和2株氟康唑耐药白念珠菌的菌丝相与酵母相细胞间均出现ERG11基因1547位点、1587位点和1617位点的不一致。结论白念珠菌的菌丝相和酵母相ERG11基因的部分序列存在差异。

摘要：目的通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列的比较,探讨两相细胞在DNA水平的差异。方法分别抽提7株来自同一亲本且对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11基因编码序列设计一对引物,对ERG11基因第948位点至第1 254位点307bp的碱基序列进行PCR扩增,以PCR产物直接测序比较两相在该片段碱基序列上的差异。结果7株白念珠菌菌丝相与酵母相在该片段的碱基序列无差异。结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因的第948位点至第1 254位点序列无差异。

摘要：目的通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因PCR-LIS-SSCP图谱的比较,探讨两相细胞在DNA水平的差异。方法分别抽提16株来自同一亲本且对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11基因序列设计7对引物,对其进行分段PCR扩增,扩增产物经单链变性后,以非变性聚丙烯酰胺凝胶进行SSCP分析。结果16株白念珠菌菌丝相与酵母相均能扩增出目的片段,SSCP图谱显示两相细胞的ERG11基因序列存在多位点差异。结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11,基因存在着差异。

摘要：目的探讨白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因启动子部分(-440～-1)碱基序列的差异以及ERG11基因启动子突变与白念珠菌对氟康唑敏感性的关系。方法分别提取从同一亲本来源、对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11基因启动子序列及其编码序列设计一对引物,对ERG11基因上游启动子部分碱基序列(-503～53)进行PCR扩增,经PCR产物直接测序比较白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因启动子序列(-440～-1)的差异以及对氟康唑敏感性不同的白念珠菌ERG11基因启动子序列的差异。结果白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11启动子序列未发现差异。氟康唑敏感株白念珠菌ERG11基因启动子的-365,-353,-328,-310,-308,-299,-295,-293,-292,290,-289位点为杂合状态,且在-284位点有一等位基因发生单碱基缺失(-284delT);而在白念珠菌氟康唑剂量依赖性敏感和耐药株上述杂合现象消失。结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因启动子-440～-1区碱基序列无差异;ERG11基因启动子突变可能与白念珠菌对氟康唑耐药有关。

摘要：目的临床上注射组织填充剂时,即使回抽误注入血管中的针剂,仍然有可能发生「扎入血管后回抽却没发生血液回流」的现象称之为回抽的伪阴性。本论著将透过回抽聚左旋乳酸针剂证实回抽伪阴性的存在,并提供简单有效的方法从而避免其发生以增加临床的注射安全性。方法回抽伪阴性发生的关键在于回抽的时间,因此设计将一个3ml的针筒装满人类新鲜血液以模拟体内血管情形,再将聚左旋乳酸针剂插入3ml的模拟血管中回抽,纪录是否立即性发生血液回流,并且以不同的聚左旋乳酸注射针头的尺寸、不同的剩余剂量及不同的泡制时间等差异做为操纵变因观察其栓塞情形。结果将聚左旋乳酸针剂插入模拟血管后回抽,在不同尺寸的针头;不同剩余剂量以及不同的泡制时间下,血液回流的速度相当快,几乎立即性发生回血,用肉眼辨识几乎无法测量等待时间,420次实验当中仅有5次没有立即性回血,发生率约1.2%。结论根据实验结果,透过SPSS检验证实使用聚左旋乳酸注射制剂填充时,将不受到其泡制时间长短、针头大小、残余剂量的影响,若能在注射前习惯性回抽,于刺入血管的前提下将可以立即辨识回血发生推估可能误将针头扎入血管,从而停止操作将可以增加注射过程的安全性。

摘要：目的通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERGIl基因限制性片段长度多态性分析，比较两相细胞在DNA水平的差异。方法分别抽提来自同一亲本、对氟康唑敏感性不同的白念珠菌（CA-1，CA-2，CA-4，CA-6，CA-7，CA-9，CA-11，CA-13～CA-17）菌丝相与酵母相基因组DNA，根据ERG11基因序列设计一对引物，对其进行PCR扩增（包括部分上游和下游非编码区），扩增产物分别用AccⅠ和MunⅠ消化、琼脂糖凝胶电泳后观察。结果各株白念珠菌菌丝相与酵母相均能扩增出约1734bp大小的目的片段，CA-7，CA-14，CA．16和CA-17株两相细胞ERG11基因RFLP图谱存在差异，其余受试菌株未见差异。结论从DNA全貌来看，白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因存在差异。

摘要：目的研究硒代蛋氨酸对中波紫外线（UVB）致HaCaT细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法培养HacaT细胞，分为4组：①正常对照组，不做任何处理；②硒代蛋氨酸组：分别加入1、10、50、100、200nmol／L和1p,mol／L硒代蛋氨酸预孵育24h；③uVB组：30、60、90mJ／cm2UVB照射；④硒代蛋氨酸＋UVB组：不同浓度硒代蛋氨酸预孵育24h后进行不同剂量UVB照射。采用噻唑蓝（MTr）法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）活性及丙二醛（MDA）水平。采用析因设计方差分析、单因素方差分析对数据进行统计学分析，多重比较采用LSD法。结果析因设计方差分析结果显示，UVB照射对细胞增殖活性有抑制作用（F=128．04，P〈0．05），且随UVB强度增加，细胞增殖活性逐渐下降，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；硒代蛋氨酸预孵育对细胞增殖活性也有影响（F=5．95，P〈0．05），其中10nmol／L-1p,mol／L硒代蛋氨酸＋UVB组与UVB组比较，细胞增殖活性显著升高（P〈0．05）；UVB照射和硒代蛋氨酸对细胞增殖活性无明显交互作用（F=1．65，P〉0．05）。30mJ／era2UVB照射后，UVB组凋亡率（31．9％±2．67％）较正常对照组（4．1％±0．67％）显著升高（P〈0．05）；而10、50、100、200nmol／L和1μmol／L硒代蛋氨酸＋30mJ／cm。UVB组凋亡率[依次为：（21．9±3．72）％、（17．2±1．67）％、（4．6±0．85）％、（7．5±1．86）％、（13．5±1．95）％]均较30mJ／cm2UVB组凋亡率显著下降（P〈0．05）。30mJ／era2UVB组与正常对照组相比，SOD和GSH—Px活性降低，MDA含量升高（P〈0．05）；10nmol／L-μmol／L硒代蛋氨酸＋30mJ／cm2UVB组与30mJ／cm。UVB组比较，SOD和GSH—Px活性增高，MDA含量下降（P〈0．05）。结论硒代蛋氨酸可以减轻UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤，其机制与增强抗氧化酶活性、减少氧自由基有关。

摘要：目的用pSilencer2.1质粒载体构建人类乳头瘤病毒6b型L1衣壳蛋白HPV6bL1短发夹shRNA质粒重组体,并进行序列分析,为探索尖锐湿疣基因抗体防治研究治疗的新途径打好基础。方法用DNA重组技术将针对人HPV6bL1基因的不同部位所设计的3对设计有小发夹结构的2对DNA序列。经退火成互补双链,再克隆至pSilencer2.1-U6 neo质粒载体中构建重组体,转化DH5а菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。结果成功构建了HPV6bL1shRNA质粒重组体。结论HPV6bL1 shRNA质粒重组体的成功构建为研究尖锐湿疣基因靶向抗体打下基础。

摘要：根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-EGFP融合蛋白基因的哺乳动物细胞表达载体。采用细胞核转染技术将重组表达载体转染K562细胞,以流式细胞仪和共聚焦显微镜分析,可检测到EGFP的绿色荧光,表明Sars7a-EGFP得到表达,该蛋白分布于整个细胞,提示Sars7a并非膜蛋白,更可能是胞浆蛋白。此外,该蛋白的表达对K562细胞凋亡无明显影响。

摘要：目的　为了判断临床和实验室标本中是否存在病原性真菌。方法　设计了一个以热启动聚合酶链反应 (PCR)为基础的实验方法 ,以一段真菌特异性DNA序列作为通用引物进行检测。引物序列为 :①AACTTAAAGGAATTGACGGAAG ;②GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC。结果　该法能在 3小时之内对所用的全部 2 3种共 42株重要病原性真菌及经培养证实有真菌的 2 2份临床标本成功地扩增出一条310bp的DNA片段 ,但对其它微生物和人体细胞均未扩增出类似片段。该法敏感性高 ,特异性强。结论　采用通用性强的引物系统配合特异性高的热启动PCR技术检测临床和实验室标本中是否存在病原性真菌的方法有重要的应用潜力。