摘要：目的建立一种快速、敏感度高的实时荧光环介导等温定量检测HIV-1DNA的方法。方法根据HIV病毒基因序列选择6个保守区域设计4条环介导等温扩增（LAMP）引物，建立环介导等温扩增体系，同时在体系中加入SYBRGreenI荧光染料，并评价该方法的特异性和敏感度。结果成功合成实时荧光环介导等温定量检测HIV-1DNA反应体系，检测200例HIV感染者外周淋巴细胞HIV．1DNA，其中有195例阳性，并检测50例健康对照结果均阴性。其中有HIV-1DNA定量结果显示最低含量为51拷贝／ml，最高含量为8．21x10^6拷贝／ml，平均值含量为5．78x10^5拷贝／ml，其中病毒含量比较集中在10^5数量级范围，共162例占83．08％。采用10倍稀释法发现该方法最低检出限为50拷贝／ml。对乙型肝炎病毒、疱疹病毒、丙型肝炎病毒进行交叉实验结果均为阴性。结论HIV感染者外周血中几乎都存在HIV-DNA，实时荧光环介导等温扩增是一种快速、敏感度高、特异性强的方法，适合各级医院的临床检测。

摘要：目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法,检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)。方法根据基因库信息,以HSV-2的gG基因区为靶基因,设计合成引物和荧光探针。采用重组质粒构建标准品,优化反应体系进行方法学评价,同时对350例临床诊断HSV-2感染者和50例健康体检者的分泌物进行检测。结果成功建立了TaqMan技术的real-time PCR方法。通过反应体系优化重复性良好,批内变异系数CV=2.56%,批间CV=5.15%。特异性高,对乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒及解脲支原体、沙眼衣原体阳性标本进行检测无特异性扩增,灵敏度达到500拷贝。从350例临床诊断HSV-2感染者的分泌物中,检出HSV-2DNA 288例,检出率82.29%;50例健康体检者分泌物中未检出HSV-2DNA。结论 real-time PCR方法能够快速、准确地检出HSV-2DNA,其特异性强、灵敏度高,可用于临床诊断HSV-2感染。

摘要：目的:建立一种快速、准确检测T细胞受体重排删除环(TRECs)的方法,用来评价慢性乙型肝炎患者胸腺输出功能。方法:根据T细胞受体(TCR)基因序列设计引物与探针,建立TaqMan-MGB双标记探针技术定量测定外周血中TRECs的含量,通过重复性、敏感性、准确性实验评价该方法的可靠性;并将此技术应用于慢性乙型肝炎中型(CHB)患者中评价胸腺输出功能。结果:通过多次试验成功建立了检测TRECs含量的TaqMan-MGB双标记探针实时荧光定量检测方法,并对5×10~5copies的质粒进行10倍法稀释,最低检出可达50 copies;对6. 18 Lg copies/10~6PBMCs和3. 54 Lg copies/10~6PBMCs高低浓度标本同一批次进行25次检测结果平均值为6. 08±0. 14,3. 52±0. 18 Lg copies/10~6PBMCs批内变异系数分别为2. 26%,5. 12%,对这两份标本连续5 d重复20次试验结果平均值为6. 10±0. 23,3. 51±0. 22 Lg copies/10~6PBMCs批间变异系数分别为3. 85%、6. 27%;用双蒸水代替模板进行检测无目的基因扩增。35例健康成年人外周血TRECs平均含量为5. 62±1. 38 Lg copies/10~6PBMCs,45例同年龄段CHB患者外周血TRECs平均含量为4. 09±0. 97 Lg copies/10~6PBMCs,两者差异存在统计学意义(t=11. 25,P <0. 05)。结论:Taq Man-MGB双标记探针时荧光定量PCR技术检测TRECs特异性强,灵敏度高,重复性好;成年CHB中型患者外周血TRECs含量明显低于同龄健康人群,TRECs可用于CHB患者胸腺功能的评估。

摘要：目的建立一种基于TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量PCR方法检测人类免疫缺陷病毒(human immanodeficiency virus,HIV-1)感染者外周血中HIV-1 DNA的含量。方法根据HIV-1病毒基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB荧光探针,建立TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法和定量标准曲线,优化反应方案,分析方法的灵敏度、准确性、重复性和精密度。采用该方法对20份HIV-1感染者和10份正常人的外周血进行HIV-1 DNA检测分析,并将结果与罗氏HIV DNA检测试剂盒作比较。结果成功建立了检测HIV-1 DNA TaqMan-MGB双标记探针实时荧光定量检测方法。灵敏度:该体系最低检出限可达10拷贝/ml,标准曲线方程为:Y=-3.339X+45.883,R^2=1。准确性:20份HIV-1阳性样本,HIV-1 DNA检出率100.00%,10例HIV-1阴性的健康对照,检测结果全部阴性;该检测结果与罗氏试剂盒检测结果完全一致。重复性和精密度:对高值(3×10~6拷贝/ml),低值(3×10~2拷贝/ml)2个浓度进行批内批间验证,批内CV分别为2.53%、3.02%;批间CV分别为2.87%,4.52%,均<10%。结论成功建立了HIV1-DNA的TaqMan-MGB荧光探针实时定量PCR方法;该方法具有较高的准确性、灵敏度以及精密度和重复性,能够为临床HIV1感染者提供早期诊断和治疗效果监测。

摘要：目的建立一种快速、敏感度高的HIV-1 DNA病毒检测方法。方法针对HIV-1型病毒序列的特点寻找6个相对保守的区域设计4条环介导等温扩增(LAMP)引物,建立HIV-1 DNA-LAMP快速检测方法,并评价其特异性和灵敏度。结果 200例HIV感染者外周淋巴细胞中,应用LAMP法检测出195例HIV-1 DNA阳性(阳性率为97.5%),50例健康对照结果阴性。采用10倍稀释法,LAMP技术的最低检出限为50 copies/ml的HIV-1 DNA病毒。对乙型肝炎病毒、疱疹病毒、丙型肝炎病毒进行交叉实验结果均为阴性。结论 LAMP是一种快速、敏感度高、特异性强的方法,适合各级医院的临床检测。

摘要：目的:评估不同停药时间对富马酸替诺福韦酯(tenofovir disoproxil fumarate,TDF)母婴阻断孕产妇的乙型肝炎病毒(HBV)标志物、病毒学指标及ALT变化的影响。方法:采用前瞻性、随机对照研究。选择孕24~28周开始服用TDF抗病毒治疗的HBV携带孕妇共120名为研究对象,随机分成A组(分娩时停药组)和B组(分娩后4周停药组),检测两组孕妇服药后不同时间段以及不同停药时间点HBV DNA定量、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)及血清中ALT水平变化,并采用Wilcoxon秩和检验、χ2检验进行差异性比较分析。结果:106名孕产妇完成检测和随访,A组56人和B组50人。两组孕妇HBsAg水平与各自基线相比以及两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。B组患者的HBeAg(M=2.920 Log 10 S/CO)和HBV DNA水平(M=1.477 Log 10拷贝/mL)在停药时明显低于A组(M=3.045 Log 10 S/CO,M=2.647 Log 10拷贝/mL),差异有统计学意义(Z=3.126,P=0.002;Z=-2.940、P0.05)。各组停药后ALT异常发生率(A组41.07%,B组40.00%)明显高于孕期异常率(A组19.64%,B组16.00%),差异有统计学意义(A组:χ2=6.081,P=0.014;B组:χ2=7.143,P=0.008);两组停药后ALT异常率相比差别较小,差异无统计学意义(χ2=0.238,P=0.625)。对于孕期ALT异常孕产妇,A组出现停药后ALT异常率明显高于B组(A组100%,B组62.50%),差异有统计学意义(Z=0.696,P=0.048)。结论:分娩时停药和分娩后4周停药对孕产妇停药后的HBsAg、HBeAg、HBV DNA、ALT水平的影响没有较大差别。对于孕期出现ALT异常孕妇,在分娩时停药比分娩后4周停药更容易出现停药后ALT异常。建议对孕期出现ALT异常的孕妇,加强产后监测,必要时适当延迟停药时间。