摘要：为筛选和验证条纹斑竹鲨肝脏中环形RNA(circRNA)及探究其在肝癌细胞HepG2中过表达对肝癌细胞增殖、迁移能力的影响,本研究主要进行了两项实验:对条纹斑竹鲨肝脏circRNA进行高通量测序和预测,随后设计正、反向引物验证其真实性;构建circRNA过表达载体,将其瞬时转染进肝癌细胞HepG2,进行CCK-8和划痕实验来评价其对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果显示:预测到有4558条circRNAs,并确认了14条circRNAs的真实性;qRT-PCR实验表明在肝癌细胞HepG2中能瞬时过表达circRNA 13-566、circRNA 4-475、circRNA 5-402、circRNA 294-177、circRNA 30-219;且CCK-8和划痕实验显示,这5条circRNAs过表达后,均能不同程度地抑制肝癌细胞的增殖和迁移能力,其中circRNA 4-475、circRNA 294-177作用尤为显著。上述结果为深入研究条纹斑竹鲨肝脏中circRNA及其在肝再生、肝癌治疗方面的功能提供了新思路和基础。

摘要：该研究通过慢病毒感染的方式构建携带T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3及可结晶区域[T cell immunoglobulin and mucin domain 3 and fragment of crystallizable,TIM-3(Fc)]目的基因的稳定转染细胞株并检测TIM-3(Fc)分泌蛋白的表达。设计特异性引物PCR扩增TIM-3(Fc)片段,重组插入慢病毒表达载体pCD513中并鉴定阳性克隆,无内毒素提取质粒pCD513-TIM-3(Fc)、pSPAX2和pMD2.G共转染293T细胞包装慢病毒,再利用慢病毒感染悬浮HEK293细胞,最后通过嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株293/TIM-3。再通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测TIM-3(Fc)目的基因在转录和翻译水平上的表达,用时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)检测细胞产生TIM-3(Fc)分泌蛋白的能力。成功构建了pCD513-TIM-3(Fc)慢病毒表达载体,qRT-PCR、WB和TRFIA检测表明,293/TIM-3细胞株成功表达了TIM-3(Fc)分泌蛋白。成功构建了重组人可溶性TIM-3稳定转染细胞株293/TIM-3并成功表达了TIM-3(Fc)分泌蛋白,为进一步研究可溶性TIM-3蛋白的生物学功能提供基础。

摘要：微针是一种新型的药物经皮递送技术,能穿透皮肤角质层,形成微孔通道,促进药物的渗透和吸收,在药物递送中有重要作用.本文从微针的结构和功能特点,系统阐述了聚合物微针的结构和功能设计,以及制造聚合物微针的材料和方法、微针的给药方式;综述了微针经皮递送技术近年来在抗肿瘤、疫苗递送、血糖调控、组织液提取和检测,以及生物传感等领域中的研究进展,并对其优势及存在的问题进行分析,总结了微针技术发展需要解决的关键问题,展望了微针疫苗未来的发展方向.

摘要：【目的】水稻株高和穗型在产量形成中发挥着重要作用。鉴定与克隆水稻株高和穗型发育相关基因,可以丰富水稻株高穗型发育调控的分子机理,为分子设计育种奠定理论基础和提供基因资源。【方法】在粳稻日本晴T-DNA插入群体中筛选到矮化小穗突变体dsp2-D(dwarf and small panicle 2-Dominant),对其主要农艺性状进行了分析;采用图位克隆法结合T-DNA标签分离法进行了基因定位和克隆;利用半定量PCR和q RT-PCR进一步确定dsp2-D的候选基因;遗传转化实验验证了DSP2的功能。【结果】与野生型日本晴相比,dsp2-D突变体表现为半矮化、穗轴和枝梗明显缩短、穗型直立、千粒重降低等特征;遗传分析表明该突变体受一对不完全显性单基因控制;利用图位克隆将DSP2定位于第2染色体标记RM208和RM7337之间,与RM3850共分离;随后遗传分析发现,T-DNA插入位点与dsp2-D表型共分离,利用TAIL-PCR分离T-DNA插入序列,显示T-DNA插入到上述RM208和RM7337之间的两个基因之间。RT-PCR检测发现,位于T-DNA插入位点下游的一个编码LOB家族转录因子基因的表达量明显增加,而其他5个基因的表达量变化不明显,表明该基因可能为DSP2的候选基因;在野生型日本晴中过量表达DSP2基因,转化植株出现半矮化、小穗的表型,与dsp2-D表型类似,从而验证了DSP2的功能。【结论】DSP2基因的过量表达是产生dsp2-D突变表型的原因;DSP2基因对水稻株高和穗长发育具有负向调控作用;为进一步丰富株高和穗型的遗传调控网络打下了基础。

摘要：本研究采用高盐低p H值法提取多花黄精叶绿体DNA (cpDNA),并通过L9(33)正交试验,以缓冲液中的Na Cl浓度、叶片用量及去核离心力为考察因素,优化多花黄精cpDNA提取工艺,并设计核基因组及叶绿体基因组特异性引物,验证cpDNA质量。结果表明,当NaCl浓度为1.50 mol/L,叶片用量为10 g,去核离心力为600×g时,以提取的cpDNA为模板,进行PCR扩增,能扩增出叶绿体基因片段且没有扩增出核基因片段,表明提取的cpDNA没有核基因组污染,质量好,产率高,能满足后续基因扩增等实验要求,该条件为本研究的最佳条件。该方法简便快速,对实验仪器要求不高,成本低,能够为黄精属植物cpDNA的提取提供参考。

摘要：为开发一种快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的实时荧光定量PCR方法,根据引物设计原则在病毒基因组序列保守区设计了一对PEDV特异性引物,通过系统优化建立了EvaGreen实时荧光定量PCR方法,对其特异性、灵敏度和重复性进行了分析,并将该方法应用于90份临床样品检测。结果表明:该实时荧光定量PCR可以特异性地检测PEDV,对其他非靶标病毒无交叉反应,最低检测限为5 copies/μL;使用3个不同浓度的标准品进行批内和批间重复,Ct值的变异系数在2.8%以下,表明该方法重复性好;临床样品中PEDV的阳性率为48.9%。建立的实时荧光定量PCR是一种快速、准确、高度灵敏且特异的检测方法,可用于PEDV流行病学调查和临床诊断。

摘要：为了优化铁皮石斛多糖提取工艺,采用单因素实验考察超声功率、超声时间、纤维素酶浓度、木瓜蛋白酶浓度、液料比和浸提温度等因素的影响,然后采用正交设计试验方法安排实验,通过Matlab建立三层结构的BP神经网络(Back propagation neural network,BPNN),并结合遗传算法(Genetic algorithm,GA)对工艺条件进行全局寻优,获得最佳提取工艺。结果表明:纤维素酶会对铁皮石斛多糖造成破坏,不利于铁皮石斛多糖提取,而木瓜蛋白酶可显著增加对铁皮石斛多糖的提取得率;铁皮石斛多糖的最佳提取工艺为液料比95∶1,超声功率400 W,木瓜蛋白酶浓度1400 U/g,提取温度48℃,在此工艺条件下铁皮石斛多糖得率达33.4%,优于普通热水提取23.6%的得率,得率提升显著,也同时表明BP神经网络模型结合遗传算法能够较好地解决此类非线性求优问题。

摘要：细胞外囊泡(EVs)是细胞分泌的纳米级小囊泡,在细胞间通讯中发挥重要作用。它们通过配体-受体结合、内吞作用、膜融合的方式被靶细胞摄取,从而执行生物学功能。在疾病诊断方面,EVs的组分可作为疾病诊断中的生物标志物,能够揭示其起源细胞的病理变化。在疾病治疗方面,EVs具有靶向递送的潜力,不仅可以作为疫苗开发的平台,还能被设计成药物递送系统,将药物直接运送到特定的细胞或组织。此外,EVs本身也可作为治疗剂用于自身免疫性疾病和癌症的治疗。本文总结EVs的生成过程和它们的摄取机制,同时探讨EVs在疾病诊断和治疗领域的最新研究进展。

摘要：引起白斑综合征(White spot syndrome,WSS)的白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是一种传播速度快、致死率高的对虾病毒,对全球对虾养殖业构成了严重威胁。为及早诊断WSS,防止WSS的传播和暴发,有必要开发一种适用于对虾养殖场所的高灵敏度WSSV检测方法。该文针对保守区VP28序列设计和优化了一种可以特异地扩增WSSV的聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。WSSV扩增产物在凝胶电泳图上可观察到清晰且单一的目的条带,而非靶标病毒则没有对应扩增产物出现,最低检测限可以达到50拷贝/反应;利用该PCR方法检测杭州地区采集的112份对虾混样样品,WSSV阳性率为15.7%。该特异和灵敏的PCR方法可被应用于WSS流行早期监控。

摘要：猪萨佩罗病毒(Porcine sapelovirus,PSV)是引发猪腹泻的重要病毒之一。为开发一种能快速、准确检测PSV的聚合酶链式反应检测方法,针对PSV的保守区3D基因设计了一对特异性引物,优化了聚合酶链式反应退火温度,分析聚合酶链式反应检测方法特异性和灵敏度,并应用于猪场样品检测。结果表明:建立的聚合酶链式反应检测方法可特异性扩增出PSV目的片段,对其他非靶标猪腹泻病毒则无条带产生,检测低限为5拷贝/μL;在浙江地区采集的88个健康猪粪便样本中检测PSV阳性率为7.95%。该PSV聚合酶链式反应检测方法特异性强、灵敏度高,可应用于PSV前期诊断和防控。