摘要：为建立一种可同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同基因型的检测方法,本试验针对PCV2、PCV3和PCV4的ORF2基因保守区域设计引物和探针,将人工合成目的基因与质粒连接,构建阳性质粒PCV2-ORF2、PCV3-ORF2和PCV4-ORF2。通过优化引物浓度、探针浓度、退火温度等参数,建立PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法对38份临床样品进行应用检测,对24个养猪场(户)进行流行病学调查。结果显示,建立的方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,且与其他常见猪病病原不发生交叉反应;对PCV2、PCV3和PCV4的最低检出浓度分别为1.56×10、1.28×10和1.76×10拷贝/μL;批内和批间变异系数均小于2%,重复性好;38份临床样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性样品分别为17、3和1份,从24个养猪场(户)采集的689份样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为33.33%、12.50%和8.33%。结果表明,本试验建立的PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PCV的快速分型检测,为PCV的临床诊断和流行病学调查提供了检测工具。

摘要：为建立一种快速鉴别诊断鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的方法,试验针对鸡毒支原体pvpA基因和鸡滑液囊支原体vlhA基因保守序列,分别设计引物和TaqMan-MGB探针;人工合成包含荧光PCR扩增目的基因的序列,并与载体连接后构建重组质粒MG-pvpA和MSvlhA,测序正确后作为标准质粒;优化反应条件建立了MG和MS的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法,对方法的敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果显示,该方法特异性良好,与其他常见鸡病原不发生交叉反应,检测MG-pvpA、MS-vlhA的灵敏度分别达到1.58×10^(1)拷贝/μL、1.21×10^(1)拷贝/μL,批内与批间的变异系数均小于2%,从36份临床样品中分别检出MG和MS阳性样品11份、8份,与商品荧光PCR试剂盒符合率达到100%。研究表明建立的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法特异性强、重复性好、敏感性高,可用于检测临床样品,快速准确地鉴别MG和MS,有利于鸡群中支原体的监测和净化。

摘要：为了解山东省家禽养殖场的生物安全水平,以问卷调查方式,对养殖场基本信息、场内区域划分、免疫接种、引种购进、消毒、饲养管理等问题展开调查。经预调查后,2021年6—7月在全省范围内开展本次调查。在全省16个地级市,采用随机抽样方式,每地级市抽检1~2个县(市、区);应用配额采样方式,在县市域内选取蛋鸡养殖场、肉鸡养殖场以及种禽场各1家。共收到有效问卷141份,分别来自12个地级市36个县(市、区),其中来自蛋鸡养殖场、肉鸡养殖场和种禽场占比分别为63.83%、26.95%和9.22%。所调查养殖场中,按照管理区、生产区、生活区进行区域划分的133家,一半以上的养殖场能做到每周至少消毒1次;137家养殖场有免疫计划,而无免疫计划的只有4家,包括蛋鸡场1家、肉鸡场3家。肉鸡场没有隔离场所的占比最高,达44.7%。106家养殖场对患病动物进行无害化处理。结果表明,所调查家禽养殖场在区域划分、区域管理、消毒管理、环境控制等生物安全方面都进行了相关的设计和应用,在一定程度上,能够起到预防致病因子侵入、阻挡病原微生物扩散的作用,但不同类型养殖场的生物安全水平并不均衡,因此养殖场需继续提高生物安全意识,逐步建立适用于本场的生物安全体系。