摘要：为了更加快速地检测牛冠状病毒(BCoV),本试验根据BCoV的具有较高保守性的N基因序列设计1对特异性引物,结合纳米金颗粒材料,通过反应条件和体系优化,建立一种新型的快速灵敏的BCoV检测方法,并应用于临床检测。特异性试验与敏感性试验结果表明,本试验建立的nano-PCR方法对BCoV特异,与牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)均无交叉反应。nano-PCR的敏感性是普通PCR的100倍,普通PCR最低核酸检测量为2.24×10^(3)copies/μL,nano-PCR最低核酸检测量为2.24×10^(1)copies/μL。应用所建立的方法对采集的43份腹泻牛的粪拭子、鼻拭子、肺部组织样品进行检测,检出BCoV阳性样品17份,普通PCR检出阳性样品11份,两种方法的符合率为100%。此次建立的nano-PCR在检测牛冠状病毒时具有更高的特异性和敏感性,对临床上的快速诊断及检测具有一定的意义。

摘要：自从进入21世纪以来，我国的肉羊产业发展状况一直较好，该产业主要具有投资少、见效快、效益高的特点，广受养殖户的青睐。我国东北地区，地域辽阔，一年四季分明，牧草资源丰富，非常适宜养羊。为了给羊创造一个良好的生活环境，有就必要选择和建造适宜的羊舍，夏季即可以防雨防暑，冬季又可以保暖防风。本文根据我国北方的气候环境和肉羊养殖特点，从多个方面阐述了羊舍的设计方案和建造注意事项。

摘要：为建立一种准确且灵敏的水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR检测方法(dd PCR),本研究根据AMDV-G基因保守区,设计特异性引物及探针,并对反应条件进行优化,初步建立检测AMDV的dd PCR方法。同时对该方法的特异性、敏感性和重复性进行分析。结果显示,dd PCR的退火温度为55℃,最佳引物和探针终浓度均为10μmol/μL。绘制的标准曲线结果显示,核酸标准物质稀释倍数的对数与对应检出拷贝数的对数之间呈良好的线性关系(R^(2)=0.9945>0.99)。建立的dd PCR方法的特异性强,除能检测到AMDV以外,对相关病原如水貂犬瘟热病毒、犬细小病毒、貂肠炎病毒、犬冠状病毒、犬腺病毒I型、狂犬病毒的检测结果均为阴性。对AMDV核酸标准物质的检测限为6.2拷贝/μL,敏感性高,比荧光定量PCR(q PCR)敏感性高10倍。对不同稀释度AMDV核酸标准物质的批内和批间重复性试验的变异系数均<5%,重复性好。采用建立的dd PCR方法和荧光定量PCR方法对貂场采集的40份水貂脏器组织样品进行检测,两种检测结果基本一致,但dd PCR敏感性更高。上述结果表明,本研究建立了一种特异性强、灵敏度高、重复性好的AMDV定量检测方法,为水貂阿留申病毒的有效防控提供技术支持。