摘要：目的 设计并构建靶向Tsc1和Tsc2基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,并在细胞水平验证基因编辑效力。方法针对小鼠Tsc1和Tsc2基因分别设计3个sgRNA导向序列,构建sgRNA表达载体,与Cas9表达质粒共转染小鼠N2a细胞,经药物筛选获得阳性细胞后,PCR扩增打靶位点的DNA片段,利用TA克隆测序验证打靶效率。结果 Tsc1基因Tsc1-M-sgRNA2、Tsc1-M-sgRNA3及Tsc2基因Tsc2-M-sgRNA1、Tsc2-M-sgRNA2、Tsc2-M-sgRNA3这5个靶点均发生基因编辑,编辑效率分别为40%、80%、30%、30%和20%。结论 成功构建了有编辑效力的靶向小鼠Tsc1和Tsc2基因的CRISPR-Cas9基因编辑系统。

摘要：为了提高构建深度卷积神经网络(CNN)的自动化程度并进一步提高目标检测精度,提出了一种改进的基于DenseNAS的神经网络架构搜索方法以自动构建铭牌检测CNN。首先,基于改进DenseNAS的Head层,设计了可搜索的、融合深浅层特征的子网模块(CSP-Block1和CSP-Block2)。然后,基于CSP-Block1和CSP-Block2构建的搜索空间,搜索铭牌检测CNN的Backbone和Head。实验结果表明,该方法在一个铭牌5分类的数据集上,耗时约9.35 GPU hours搜索出了最佳神经网络,在测试集上检测精度mAP≈97.3%,比YOLOv5等SOTA方法更高。

摘要：为保障特殊车辆在复杂且易拥堵的城市交通环境下执行紧急任务的时效性与畅通性,提出一种基于路径搜索式深度Q网络(P-DQN)的特殊车辆路线优化策略。采用回溯法协助深度Q网络(DQN)解决路径搜索过程中的死路、回路问题,利用人工势场机制引导DQN搜索路径,避免路径结果过长。结合轮盘赌选择法与贪婪值自适应调整机制进一步提升DQN选取路段和建议行驶速度时的准确性。实验在InTAS数据集上对真实城市交通进行模拟,与RERoute、CH等SOTA方法相比,P-DQN获得的总价值提高约16%。

摘要：为了提升深度卷积神经网络设计的自动化程度,并进一步提高细粒度花卉图像的分类准确率,提出了一种改进的基于DARTS的神经网络搜索方法,用于自动构建细粒度花卉图像分类模型。首先,通过构建注意力-卷积模块,形成全注意力-卷积搜索空间,增强网络对可判别特征的关注度。其次,通过构建具有更多浅层特征输入节点的密集连接缩减单元(DCR cell),保留更多的浅层特征信息,减少可判别特征信息的损失并促进多尺度特征融合。最后,在堆叠最佳cell时调整DCR cell的位置,构建参数量大小不一的网络模型,以便在更多的终端设备上部署。结果表明,该方法耗时4.5 h搜索到了最佳神经网络模型,在Oxford 102和Flower 17上的分类准确率分别为96.14%和94.12%。与AGNAS等方法相比,在Oxford 102上提高了1.40百分点,在Flower 17上提高了3.09百分点。

摘要：目的研究bs-5-YHEDA铁螯合肽联合索马鲁肽对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠认知能力和病理特征的影响。方法将40只8周龄昆明小鼠随机分为5组,分别为健康对照组、PBS组、bs-5-YHEDA铁螯合肽组、联合治疗组和阳性对照组,每组8只,雌雄各半。除健康对照组外,其他各组注射D-半乳糖连续6周诱导构建AD小鼠模型。从第4周开始连续3周,bs-5-YHEDA铁螯合肽组每隔1 d尾静脉注射200μL bs-5-YHEDA(1 mg·mL^(–1))1次;联合治疗组每天交替给予200μL bs-5-YHEDA铁螯合肽(1 mg·mL^(–1))和索马鲁肽(25 nmol·kg^(–1)·d^(–1))1次;阳性对照组,每隔1 d灌胃给药美金刚(3.3 mg·kg^(–1)·d^(–1))1次;健康对照组和PBS组注射同等剂量PBS。治疗结束后通过Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力,解剖取全脑和全血,HE染色观察海马区病理改变,免疫组织化学、酶联免疫吸附、免疫印迹检测Aβ表达和Tau蛋白磷酸化水平。结果在Morris水迷宫空间探索试验结果显示,与健康对照组比较,PBS组小鼠穿越平台次数、目标象限游泳路程比和时间比的差异均具有统计学意义(P<0.05);与PBS组相比较,联合治疗组目标象限游泳路程比增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与健康对照组小鼠相比,PBS组海马区锥体细胞层次减少,排列紊乱,细胞水肿,细胞核固缩深染,药物治疗后各治疗组海马区细胞排列紊乱、胞核固缩深染及细胞凋亡情况明显改善。免疫组织化学染色和Western blotting结果显示,与健康对照组小鼠相比,PBS组小鼠Aβ表达水平和Tau蛋白磷酸化水平明显升高,药物治疗后各组小鼠Aβ表达水平和Tau蛋白磷酸化水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.001)。结论bs-5-YHEDA铁螯合肽联合索马鲁肽能够有效改善AD小鼠学习记忆能力和病理特征,但从免疫组织化学和免疫印迹实验结果来看,相较于单一bs-5-YHEDA铁螯合肽组,联合治疗组对AD模型小鼠病理特征的改善并不明显,提示设计的双靶点联合治疗对AD模型鼠认知改善可能存在阈值效应,多靶点组合治疗效果的优化及验证有待进一步的研究。

摘要：《模拟电路与数字电路》是一门非常重要的基础课程,其教学的基本目的和任务是使学生通过本课程的学习,获得电工技术、电子技术必要的基本理论、基本操作技能,为学生学习后续课程或从事专业工程技术和科研工作打下一定的基础。在对以学生为教学主体的课程教学改革探索中,提出了基于翻转课堂结合OBE的教学理念,以成果为导向,探索并实践了老师及时反馈、学生积极参与的混合式教学模式,并将其应用到《模拟电路与数字电路》课程中,在日常教学过程强调学生的主体地位,在授课前授课中授课后这三个教学阶段合理设计混合式课程教学内容,从理论性和实践性两个方面改进综合评价考核方式,实施过程性考核,将传统知识型授课转变为混合式学习的教学方法,逐渐提高学生的动手能力和创新能力,从而切实改善教学效果。

摘要：目的利用CRISPR/Cas9系统对小鼠Star基因进行精确编辑,构建模拟人类STAR基因突变的细胞模型。方法选择中国先天性类脂质性肾上腺皮质增生症(CLAH)患者的热点突变区域,并设计相应的单导向RNA(sgRNA)。构建表达sgRNA的重组质粒,将其与慢病毒包装质粒共同转染至HEK-293T细胞并制备慢病毒颗粒以感染小鼠TCMK细胞。采用嘌呤霉素进行病毒感染后阳性细胞的筛选,提取阳性细胞的基因组DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增目标位点的基因组DNA片段,并利用TA克隆和Sanger测序技术,对编辑位点与效率进行统计分析。结果成功设计了有效的sgRNA序列,并利用CRISPR/Cas9系统成功构建了编辑小鼠Star基因的细胞模型。结论本研究通过精确编辑小鼠Star基因,成功构建了模拟人类STAR基因突变的CRISPR/Cas9系统,为深入研究CLAH的致病机制及探索潜在治疗方法提供有力工具,具有重要的科学意义和应用价值。

摘要：目的:ABCB11基因突变是肝内胆汁淤积症2型(PFIC-2)的主要病因,本研究试图构建特异性靶向小鼠Abcb11基因的CRISPR/Cas9系统,并检测该系统的基因编辑效率。方法:根据小鼠Abcb11基因的DNA序列,设计3条sgRNA导向序列,通过构建sgRNA表达载体,将sgRNA质粒和Cas9质粒一起转入N2a细胞,药物筛选,阳性细胞DNA的PCR产物测序以及TA克隆测序等实验,完成基因编辑系统构建及效率检测。结果:sgRNA3导向序列可用于编辑小鼠Abcb11基因,编辑效率为61.54%。结论:靶向小鼠Abcb11基因的编辑系统构建成功,且有较高的编辑效率,为后续建立精准模拟人类PFIC-2疾病的小鼠模型以及临床治疗奠定了基础。

摘要：目的:单纯型大疱性表皮松解症(EBS)是一种单基因遗传性皮肤疾病,KRT5基因突变是其主要的遗传学病因。本研究在综合分析人KRT5基因的致病突变位点后,在其附近设计、合成3条sgRNA序列,并构建靶向小鼠KRT5基因的CRISPR/Cas9系统,以模拟人KRT5基因的致病突变。方法:分析数据库中人KRT5基因的致病突变位点,设计3条小鼠拟突变位点sgRNA序列;构建pGL3-U6-KRT5-sgRNA表达质粒,然后采用Lipofectamine3000转染试剂将pGL3-U6-KRT5-sgRNA表达质粒与pST1374-NLS-flag-linker-Cas9表达质粒共同转染入小鼠N2a细胞,再以嘌呤霉素和杀稻瘟菌素进行筛选;采用PCR产物测序和TA克隆测序鉴定突变序列,分析打靶效力。结果:成功构建了3个pGL3-U6-KRT5-sgRNA表达质粒,将其转入小鼠N2a细胞后,打靶KRT5基因的效力最高为64.29%,最低为16.67%。结论:设计的CRISPR/Cas9系统可以有效打靶小鼠KRT5基因,为后续建立KRT5基因编辑的小鼠模型,探讨KRT5基因在EBS发生、发展中的作用和机制奠定基础。

摘要：针对卷积神经网络设计高度依赖专家经验、需要大量参数调优和效率低的问题,提出了一种基于单路径激活搜索策略的神经架构搜索方法(SPA-NAS),并应用于色素性皮损图像分类。该方法将搜索空间构建为一个过参数化神经网络架构,该架构包含了所有的路径,并且每条路径都被分配一个架构参数以表示路径的占比强度。为了避免搜索所有路径,提出了一种单路径激活策略对构建的过参数化神经网络架构进行路径剪枝,以得到一个更加精简的子架构。搜索时,采用梯度下降法学习和优化架构参数,得到最佳子架构。最后,采用子架构堆叠方式构建色素性皮损图像分类卷积神经网络。实验表明,该方法自动构建的卷积神经网络取得了比Dilated-VGG19和ARL-CNN等SOTA方法更高的分类准确性,在ISIC2017和HAM10000数据集上的平均敏感度分别为62.4%和69.8%。