摘要：目的:构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统并在细胞水平上对其打靶功能进行验证。方法:参考数据库中人SLC39A4强致病位点,对比分析人和小鼠Slc39a4蛋白序列,将人强致病位点定位于小鼠基因组上。根据定位区域的小鼠基因组DNA序列,设计3个向导RNA(small guide RNA,sgRNA)序列,构建表达载体。通过细胞转染、药物筛选,获得阳性细胞。利用PCR扩增、T7 Endonu-clease酶切反应和TA克隆测序分析打靶情况以及打靶位点的基因型和编辑效率。结果:成功构建了3个sgRNA,sgRNA3导向序列可诱导Cas9蛋白打靶小鼠Slc39a4基因,打靶效率为30%。结论:成功构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统,为制备SLC39A4基因编辑动物模型,深入研究SLC39a4基因的致病机理奠定基础。

摘要：基于医疗大数据的现实世界研究是临床研究的重要手段之一,它不仅能从庞大的数据中归纳和总结医学知识,还能为卫生政策的制定提供依据。与随机对照试验不同,现实世界研究常常是观察性的,研究设计因缺少随机化过程而导致暴露组(实验组)与非暴露组(对照组)间的混杂因素(如基线特征)分布不均,进而降低两组间的可比性,导致效应估计偏差。