摘要：目的:构建特异性针对IER3IP1基因的shRNA(Short Hairpin RNA)的真核表达载体,观察对IER3IP1基因表达的沉默作用,筛选出抑制效果较好的干扰片段。方法:针对IER3IP1基因,设计合成2对特异性DNA片段以及1对无关序列的阴性对照DNA片断,将它们插入真核表达载体pGenesil-1中构建重组质粒,质粒转染L02正常肝脏细胞株后,以半定量RT-PCR法检测转染后24、48、72hIER3IP1基因的抑制效果。结果:成功构建2个特异性针对IER3IP1的shRNA真核表达载体;所构建的载体中有1对能够特异性的降低L02细胞中IER3IP1的mRNA表达水平,且干扰效果显著,抑制率较高,与空载对照组比在转染后24、48、72h抑制率分别为64%、79%、69%。结论:设计构建的真核表达载体可以特异性干扰IER3IP1基因的表达,为进一步研究IER3IP1基因的功能奠定了基础。

摘要：临床生化检验是一门实践性很强的学科。实验教学的核心是如何提高学生的实验能力，实验能力的培养也是一种智能的培养。我们所说的实验能力是一种综合实验能力，主要包括两个方面：即基本实验能力．表现在一般的实验技能，操作能力等；创造实验能力，加实验的总体设计、实验方向的选择、实验方案的确定、综合性分析、新知识的探索等方面。我们根据教学目的和培养方针，提出了教学要。夯实基础，适当提高”。所谓“夯实基础”．即注重学生基本实验能力的培养，给学生以规范的操作、全面的实验技术和方法；所谓“适当提高”．一方面将先进的技术、方法介绍给学生，另一方面给学生以基本的科研能力的培养。

摘要：目的：研究吴茱萸叶基因组DNA的提取方法,以用于扩增片段长度多态性（AFLP）分析。方法：设计了一种改良CTAB法：以石英砂代替液氮研磨;抽提前用不溶性PVP结合酚形成络合物,然后用缓冲液除去;抽提中加入Vc。将改良CTAB法所提吴茱萸叶DNA与传统的SDS法、CTAB法所提DNA进行比较。利用植物的核糖体DNA（rDNA）保守序列设计引物行PCR扩增鉴定吴茱萸DNA及其质量。并确定提取方法中最佳样本含量和β-巯基乙醇浓度。结果：改良CTAB法提取石虎、疏毛吴茱萸总DNA呈白色,A260/A280为1.721~1.886,DNA分子完整,约20kb左右,PCR扩增条带清晰、明亮,无杂带和脱尾。并确定0.10g为最佳样本量,2.0%为最佳β-ME浓度。结论：石英砂研磨简便、迅速、均匀,该实验所建立的改良CTAB法可有效避免次生代谢物的氧化褐变,是一种小量、快速提取吴茱萸叶DNA优化方法。

摘要：近年来,随着高科技、新实验技术向医学领域的渗透,促使医学教育急需培养高素质、创新、实用的复合型人才,因此,医学院校迫切需要对各项教学环节进行改革和创新。然而这一艰巨任务涉及面广,它包括教育观念、教育环境建设、教师与学生素质等方面的革新,每个环节互动相关,其中培养学生创新、综合能力尤为重要,但方式仍需进一步探索。

摘要：目的探讨FGF-21表达变化对FGF相关受体(FGFRs)和脂肪细胞因子表达的影响。方法设计并构建2条针对小鼠FGF-21基因的短发夹状RNA(shRNA)序列,运用双荧光蛋白检测系统初步验证其有效性,筛选出抑制有效的pGenesil-FGF21重组质粒,分别用FGF-21过表达质粒pcDNA-FGF21和FGF-21 RNAi表达载体pGenesil-FGF21转染3T3-L1脂肪细胞,采用荧光定量PCR法检测FGF-21、FGFRs、脂联素、Visfatin以及瘦素(Leptin)的mRNA表达水平。结果成功构建2条FGF-21-shRNA重组质粒。转染上述重组载体的细胞内,两组pGenesil-FGF21 GFP平均荧光强度/RFP平均荧光强度均低于阴性对照组(均P<0.05),且pGenesil-FGF21-1组更低。转染pcDNA-FGF21的3T3-L1脂肪细胞内FGF-21 mRNA表达明显增加(P<0.01),转染pGenesil-FGF21-1的细胞内FGF-21 mRNA表达降低77.8%(P<0.05)。FGF-21过表达的脂肪细胞内以β-klotho和FG-FR1 mRNA表达明显升高,而Leptin mRNA表达明显降低;而FGF-21表达缺陷时则相反(均P<0.05)。结论 FGF-21可能主要通过β-klotho和FG-FR1途径激活受体后信号系统,并且可能通过影响脂肪细胞因子表达从而对代谢发挥其调控作用。

摘要：背景:晚期氧化蛋白产物是血液透析患者免疫功能紊乱、加速性动脉粥样硬化、透析相关性淀粉样变等长期并发症的重要致病环节。但是对于晚期氧化蛋白产物的基础性研究相对较少。主要原因之一就是不能获得高纯度且具有生物学活性的晚期氧化蛋白产物。目的:制备及纯化晚期氧化蛋白产物,并对其进行鉴定,以寻求一种制备高纯度且具生物活性的晚期氧化蛋白产物的方法。设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-09/10在解放军第三军医大学检验系临床生化教研室完成。材料:人血白蛋白为成都容生有限公司产品,Hitrap26/60sephacryl S-300为GE Healthcare产品。方法:首先纯化人血白蛋白,将纯化的人血白蛋白与次氯酸体外孵育法制备晚期氧化蛋白产物-人血白蛋白,经Hitrap26/60 sephacryl S-300分离纯化。并经变性及非变性电泳、分子筛蛋白标准鉴定其相对分子质量,经单核细胞肿瘤坏死因子α分泌实验鉴定其结构特征和生物学活性。主要观察指标:①人血白蛋白的纯化及电泳结果。②晚期氧化蛋白产物纯化及电泳结果。③晚期氧化蛋白产物-人血白蛋白促单核细胞肿瘤坏死因子α分泌的量效关系。结果:经变性及非变性电泳、分子筛蛋白标准鉴定其相对分子质量为670000,能够显著刺激单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌,时间效应显示AOPPs-HSA(1g/L)刺激6h,单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌量就已显著性升高,12h升至最高水平。结论:采用上述方法能够制备及纯化晚期氧化蛋白产物,且纯化后的晚期氧化蛋白产物具有生物学活性,为晚期氧化蛋白产物的进一步研究奠定了基础。

摘要：大鼠正糖钳夹技术(Euglycemic clamp technique)是近年来国外广泛应用胰岛素抵抗动物模型的实验研究[1].国内虽有个别报道,但其钳夹术是在麻醉及手术状态下,且未作糖代谢研究[2].我们设计了清醒大鼠胰岛素钳夹模型,用6,6-D2葡萄糖作非放射性示踪剂,给予三种浓度胰岛素输注,观察了大鼠糖代谢及血浆游离脂肪酸(FFA)的改变.

摘要：临床生化是医学检验专业中的主干课程,也是一门知识面广,实践性强,综合能力要求高的学科,除了要求学生有扎实的理论基础,熟练的操作技能之外,还必须培养学生有一定的理论联系实际、独立思考、实事求是、勇于创新的科学精神。医学检验专业本科毕业实习期间,有4个月用于专题实验和撰写毕业论文,引导学生学与用,知与行的密切结合,立足于培养学生的综合能力。通过9年指导学生毕业论文实践,取得良好的效果,现在总结如下:

摘要：设计合成3对ACRP30编码基因的反向重复序列,分别定向克隆至载体psilencer1.0的U6启动子下游,构建了相应的shRNAs表达质粒,并证实了这些重组质粒对成熟脂肪细胞中脂联素蛋白的表达有显著的抑制作用。

摘要：生物技术专业的核心实验课程是学生掌握该专业实验技能的主要途径。教师总结广东医科大学六届学生的实验教学经验发现,以教师为中心的标准实验流程式教学模式存在诸多不足,学生自主性不高,教学效果欠佳。文章提出以学生为中心,将主动参与式教学模式贯穿整个生物技术专业核心实验课程的教学模式。学生可自主选择目的基因、设计引物、主动参与实验课准备,独立完成整个具有科研性质的实验课程。通过主动参与式教学训练,学生利用所需知识,积极探索解决问题的能力,全面掌握生物技术相关实验技能,进而提高生物技术专业实验教学质量。