摘要：2019至2020年,在湖南省郴州、永州、湘西和常德烟区发生了一种严重的叶部病害,表现为叶部出现圆形或不规则黄褐色病斑,有不规则同心纹,病斑周围可见黄绿色晕圈,后期易破裂穿孔。经组织分离、形态学观察、分子鉴定以及柯赫氏法则验证,确定该病害为烟草靶斑病,病原为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kola)。在此基础上,以烟草靶斑病菌rDNA–ITS序列为靶标,设计特异性引物Rs–1,建立了特异性针对靶斑病菌的PCR检测体系,从烟草病斑处检测烟草靶斑病菌。

摘要：【目的】克隆番茄匍柄霉(Stemphylium lycopersici)SlCmr1基因,并构建SlCmr1基因敲除载体,为研究该基因功能打下基础。【方法】根据NCBI数据库提供的番茄匍柄霉基因组信息设计引物,PCR扩增得到SlCmr1基因的DNA全长和CDS序列,并对SlCmr1基因编码的蛋白进行生物信息学分析。利用SlCmr1基因上、下游1100 bp左右的序列设计引物,分别PCR扩增SlCmr1基因的上、下游片段,通过酶切连接的方法将SlCmr1基因的上、下游序列分别插入载体pCX62,构建SlCmr1基因敲除载体。【结果】SlCmr1基因的DNA全长为3275 bp,CDS长度为3018 bp,有3个内含子,编码蛋白序列全长1005 aa,分子式为C_(4882)H_(7642)N_(1404)O_(1499)S6_1,分子量为111.94 kD,理论等电点为(pI)6.64,半衰期30 h,不稳定指数58.72,亲/疏水性平均值为-0.424,预测亚细胞定位于细胞核,存在2个相邻的ZnF_C2H2结构域和1个GAL4结构域,推测SlCMR1为不含跨膜区域的非分泌、不稳定可溶性蛋白。分别将SlCmr1基因上、下游序列插入pCX62载体,成功构建了基因敲除载体p CX62-SlCmr1。【结论】SlCmr1可能是真菌调控色素合成的关键基因,在真菌的次级代谢产物合成中发挥重要作用。

摘要：采用正交设计对旱稻孢囊线虫ISSR–PCR反应体系的4因素（Taq酶、模板DNA、d NTPs、引物）在4个用量水平上进行优化试验。结果表明,旱稻孢囊线虫ISSR–PCR最佳的反应体系为：在25μL反应体系中,含Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.3μL﹑模板DNA 1μL﹑d NTPs（2.5 mmol/L）2μL﹑引物（10μmol/L）1μL﹑10×PCR Buffer（20 mmol/L Mg2＋plus）2.5μL。引物UBC887最适退火温度为48℃。优化的旱稻孢囊线虫ISSR–PCR的反应体系和程序有较好的重复性和稳定性。

摘要：根据旱稻孢囊线虫(Heterodera elachista)和常见孢囊线虫的ITS序列比对分析,设计1对旱稻孢囊线虫特异性引物He–F/He–R,特异性片段长度为281 bp。运用该特异性引物及建立的DNA提取方法和PCR体系,可特异性检测旱稻孢囊线虫单条2龄幼虫,可以从混合有1条旱稻孢囊线虫的0.1 g水稻根组织中特异性检测出目的DNA片段。特异性引物He–F/He–R与通用引物D2A/D3B结合,运用一步双重PCR检测方法可快速鉴定单孢囊,也可从初始分离的田间土壤总线虫样品中直接检测出旱稻孢囊线虫。

摘要：为了探寻辣椒尖孢炭疽病的生防药剂,从而控制该病在辣椒生产上的扩散。以辣椒尖孢炭疽病菌(Colletotrichum acu-tata)为指示菌,从浏阳河风光带土样中分离筛选出6株拮抗放线菌株,其中菌株ND045对指示菌的拮抗效果最好,菌丝生长抑制率高达71.6%。经形态观察、培养性状、生理生化鉴定,并结合16S rDNA序列分析,将ND045菌株鉴定为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。抗菌谱研究表明,该菌株对稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora cap-sici)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium omysporum)和辣椒白绢病菌(Sclerotium rolfsii)都具有较强的拮抗作用,抑菌率达40.58%～72.00%。通过单因子变量法和均匀设计法对菌株ND045进行发酵条件研究,结果表明,其最佳的发酵条件为:15 g大米粉、5 g大豆粉、0.5 g MgSO4、0.01 g FeSO4.7H2O、1.5 g NaCl、水1 000 mL、30℃、pH 8。经优化后,菌丝生长抑制率最高达到82.61%,比优化前提高了11.01%。该研究结果为辣椒尖孢炭疽病的生物防治提供科学依据。

摘要：为获得对水稻纹枯病有生防效果的拮抗放线菌，以水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani ）为指示菌，从湖南郴州天鹅山风景区土样中分离筛选出5株拮抗放线菌株，其中菌株 CZB40无菌滤液的5倍稀释液对指示菌菌丝生长抑制率高达90.45%，能使菌核菌丝萌发指数降低56.30%，而且能显著抑制菌核的形成。经形态观察、培养性状、生理生化鉴定，并结合16S rDNA 序列分析，将 CZB40菌株鉴定为极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus ）。抗菌谱研究表明，该菌株对稻瘟病菌（Magnaporthe grisea ）、桃褐腐病菌（Monilinia fructicola ）、辣椒疫霉病菌（Phytoph-thora capsici ）、草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea ）和辣椒白绢病菌（Sclerotium rolfsii ）都有拮抗作用，抑菌率达27.94%～85.71%。通过单因子变量法和均匀设计法对菌株 CZB40进行发酵条件研究。结果表明，其最佳的发酵条件为：玉米粉25 g/L、酵母粉5 g/L、MgSO40.2 g/L、NaCl 0.8 g/L、K2 HPO40.4 g、水1000 mL、29℃、pH 6.0。经优化后，菌株 CZB40无菌滤液的10倍稀释液对水稻纹枯菌丝生长抑制率最高，达到94.85%，比优化前明显提高。该研究结果为水稻纹枯病的生物防治提供科学依据。

摘要：采自湖南地区的辣椒轻斑驳病毒Pepper mild mottle virus(PMMoV)样品经单斑分离后,根据已经报道的PMMoV序列基因保守区设计6对简并引物,采用片段重叠法和RACE方法扩增、克隆获得一个全长为6 356bp的湖南分离物(PMMoV-HN1,登录号:KP345899)全基因组序列,编码4个蛋白,分别为126kD蛋白(70~3 423nt)、183kD蛋白(70~4 908nt)、28kD蛋白(4 909~5 682nt)和17.5kD蛋白(5 685~6 158nt),5′-非编码区(5′-UTR)和3′-非编码区(3′-UTR)分别含有69和198个碱基,其中5′-UTR存在一个序列为m7G5′pppG的甲基化核苷酸帽子结构。一致性分析发现PMMoV-HN1与PMMoV其他分离物的核酸一致性为94%~99%,编码的氨基酸一致性为94%~99%。全基因组序列系统进化分析表明PMMoV-HN1分离物与中国首次报道的PMMoV-CN分离物亲缘关系最近。本研究是国内报道的第二例PMMoV全基因组序列。

摘要：【目的】驱避剂可使害虫不敢接近受用者从而保护受用者免遭其害。建立高精度、可解释性强的非线性定量构效关系(quantitative structure-activity relationship,QSAR)模型对设计合成新的高效昆虫驱避剂有重要意义。【方法】基于37个芳香羧酸类化合物对家蝇Musca domestica的驱避活性,以量子化学计算软件PCLIENT获取每一化合物初始描述符,以二元矩阵重排过滤器、多轮末尾淘汰实施特征非线性筛选,以支持向量回归(support vector regression,SVR)建立非线性QSAR模型,以SVR非线性解释体系分析各保留描述符对驱避活性的影响。【结果】1 542个初始描述符的SVR模型F=1.2,特征筛选后6个保留描述符的SVR模型F=184.6,特征筛选对QSAR模型精度有重要影响。6个保留分子描述符的重要性依次为p4BCD>GATS7v>T(O..O)>JGI8>SssO>nArCONR2。【结论】保留描述符与芳香羧酸类化合物对家蝇驱避活性的非线性关系明显,获得了高精度、普适性强的非线性SVR-QSAR模型。

摘要：RNA编辑是高等植物线粒体基因转录后表达调控的一种重要方式。为探究ATP合酶F_0部分的4个亚基基因与植物雄性不育性的关系,本研究以3个烟草雄性不育系(MS中烟90、MS云烟85和MS K326)及其同型保持系为供试材料,比较分析atp6、atp9、orf25和orf B线粒体基因转录本的编辑位点。结果表明,orf25和orf B基因转录本在不育系和保持系中发生的编辑位点是一致的。atp6基因在不育系中未发生编辑,在保持系中共有6处发生了RNA编辑。与保持系相比,atp9基因在不育系中除8处共同的C→T编辑外,还缺少2个C→T的特异编辑位点,其中1个导致氨基酸类型的改变。推测不育胞质因缺少特异的线粒体基因转录本编辑而导致烟草的细胞质雄性不育。

摘要：杂种优势的利用可以有效地实现烟草高产、高抗、优质的育种目标,目前,培育雄性不育系是获取杂种烟草最有效的途径。研究发现orf25基因位于线粒体基因组中,与烟草雄性不育密切相关。本研究以烟草雄性不育相关基因orf25为研究对象,根据RNA干扰载体构建原则,将长度为606 bp的orf25基因干扰片段分别以正向、反向连接到大小为190 bp的linker连接片段的两侧,构成发夹结构的RNA干扰载体片段。将RNA干扰载体片段插入到中间载体pET30a上,最后克隆到植物表达载体pCAMBIA1301中,成功构建orf25基因的RNAi表达载体。利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-orf25-RNAi转入到烟草保持系中烟90中,经抗性筛选以及分子检测最终获得35株转pCAMBIA1301-orf25-RNAi烟草植株,其中阳性烟草有18株,转化率为51.4%。结果表明pCAMBIA1301-orf25-RNAi干扰载体已成功转入到烟草中烟90中。