摘要：UTX(ubiquitously transcribed TPR gene on the X chromosome)作为H3K27me2/3的去甲基酶,能够调控动物发育过程,并有着重要的生物学作用。根据猪Utx预测序列,扩增Utx的CDS区全长序列。利用Utx的CDS区序列信息,构建pCD513B-CMV-Utx过表达载体,设计并合成干扰shRNA和阴性对照寡核苷酸片段。其中干扰shRNA及阴性对照通过退火形成双链DNA,并插入pCD513B-U6慢病毒干扰载体。采用双酶切的方法和DNA测序鉴定重组载体。通过干扰和过表达载体质粒共转293T细胞,利用qRT-PCR筛选出最有效的干扰序列。重组质粒与其他3种慢病毒辅助包装质粒(pRsv-Rev、pGag-Pol、pVSV-G)共转染293T细胞包装慢病毒。结果表明,本试验成功扩增Utx基因的全长序列,且成功构建了Utx的过表达和干扰载体。qRT-PCR筛选出pCD513B-U6-Utx-shRNA-3干扰效率最显著,干扰效率为70%。本试验成功包装出慢病毒Lenti-Utx-shRNA、Lenti-NC和Lenti-Utx,测定的病毒滴度分别为6.1×107 TU/mL、4.8×107 TU/mL和3.9×105 TU/mL。此试验为进一步在猪源细胞中进行Utx基因的研究奠定基础。

摘要：试验旨在克隆山羊碱性氨基酸转运载体基因SLC3A1cDNA序列,探究其表达的组织特异性及其在小肠中的表达发育模式。参考GenBank已发表的绵羊、牛SLC3A1基因mRNA序列设计引物,克隆山羊SLC3A1基因的cDNA序列,采用实时荧光定量PCR的方法分析其在1日龄山羊11种组织及其在1日龄、6月龄、8月龄、10月龄、12月龄山羊十二指肠、空肠、回肠中的mRNA表达情况。结果表明,成功克隆得到了山羊SLC3A1基因cDNA序列,其与绵羊、牛、野猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别为99%、97%、88%、86%、80%和79%。SLC3A1基因转录表达有明显的组织特异性,其在1日龄山羊肾脏、回肠、空肠、结肠中表达量依次降低（P〈0.05）,其他组织中表达量很低。同一月龄山羊,SLC3A1基因在不同肠段的表达量数值上回肠〉空肠〉十二指肠。SLC3A1基因在不同月龄山羊十二指肠表达量以1日龄山羊为最高（P〈0.05）,6~12月龄山羊相同肠段之间表达量无显著差异（P〉0.05）;空肠表达量随山羊年龄的增加均呈现逐步降低的趋势;回肠表达量在各个月龄山羊之间差异不显著（P〉0.05）。结果说明,山羊碱性氨基酸转运载体基因SLC3A1的主要表达部位在肾脏和肠道,推测b0,＋碱性氨基酸转运系统转运氨基酸的主要部位为肾脏和肠道。SLC3A1基因在山羊小肠受肠段和发育阶段的影响,具有不同的表达发育模式。

摘要：本试验旨在研究陕北白绒山羊羯羊能量和蛋白质的需要量,为制定其饲养标准提供数据。选取36只体重相近、健康状况良好的陕北白绒山羊周岁羯羊,按3×3（能量×蛋白质）完全随机设计分为9组,每组4个重复,每个重复1只。各组饲粮消化能和粗蛋白质水平分别参照NRC（1981）推荐量的100%、110%、120%和90%、110%、130%设定。预试期7 d,正试期46 d。结果表明：1）饲粮能量水平对周岁羯羊的干物质采食量和平均日增重都有极显著影响（P〈0.01）,蛋白质水平对干物质采食量影响显著（P〈0.05）;饲粮能量和蛋白质水平对干物质采食量有显著的互作效应（P〈0.05）。2）低能量水平组的可消化氮显著低于中能量水平组与高能量水平组（P〈0.05）;低蛋白质水平组的进食氮、可消化氮、沉积氮、氮表观消化率均极显著低于中蛋白质水平组和高蛋白质水平组（P〈0.01）。3）总能消化率和总能代谢率均随着能量水平的提高而极显著地升高（P〈0.01）;高蛋白质水平组的总能代谢率和消化能代谢率显著低于低蛋白质水平组（P〈0.05）;能量和蛋白质水平对总能消化率、总能代谢率和消化能代谢率均产生显著或极显著的互作效应（P〈0.05或P〈0.01）。本试验得到了陕北白绒山羊周岁羯羊能量和蛋白质需要量的回归方程,饲粮的消化能和代谢能分别以8.80～10.61 MJ/kg和7.34～8.76 M J/kg较为适宜,粗蛋白质和可消化粗蛋白质分别以10.00%和7.34%为宜。

摘要：【目的】构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2原核表达质粒载体,高效重组表达PCV2壳蛋白Cap,为进一步建立PCV2 ELISA的检测方法及Cap蛋白单克隆抗体的制备研究奠定基础。【方法】根据猪圆环病毒2型ORF2基因序列设计带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的引物,进行ORF2的PCR体外扩增。用扩增的ORF2基因构建pMD18-T-ORF2质粒,经测序检测正确后,与pET-32a(+)连接获得原核表达重组质粒pET-32a-ORF2。重组质粒pET-32a-ORF2转化BL21-ΔE3后用IPTG诱导表达,对获得的纯化表达产物进行了SDS-PAGE电泳、Western blot检测。【结果】PCR扩增得到了预期580 bp的目的基因,连接载体后经测序完全正确;pET-32a-ORF2在BL21-ΔE3得到高效表达,获得以包涵体形式存在的体外重组原核表达PCV2 Cap蛋白;Western blot检测结果表明,所得到的蛋白能够识别PCV2多克隆抗体。【结论】重组质粒pET-32a-ORF2在BL21-ΔE3高效表达重组PCV2 Cap蛋白,且具有免疫学生物活性。

摘要：为检测aBD-1 mRNA在佳米驴体内可能的表达器官,根据已知aBD-1 cDNA的全长序列设计一对预计扩增产物为266bp的引物,以佳米驴舌背表面、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、气管、胰腺、膀胱、子宫、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏、淋巴结、卵巢组织中提取的总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测佳米驴的上述器官内aBD-1 mRNA的表达情况,同时以β-肌动蛋白(β-actin)基因作为内参。结果显示:aBD-1 mRNA在佳米驴的舌、盲肠和结肠内有强的表达,在食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、直肠、气管内有比较强的表达,在膀胱和子宫内有弱的表达,而在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、淋巴结、卵巢等实质性器官组织内无表达。