摘要：目的:探讨全自动生化分析仪上常规检测项目试剂对总胆汁酸检测的携带污染以及消除携带污染的有效措施。方法:以总胆汁酸为目标检测项目,脂肪酶等项目为观察项目,设计携带污染筛选和确认试验;分析采取措施前后对总胆汁酸检测结果的影响。结果:脂肪酶试剂对总胆汁酸检测有携带污染且为明显正干扰;未特殊处理时可携带污染连续6个标本;增加Smart wash程序后携带污染有所缓解但不能消除;将LIPA和TBA试剂分别置于仪器的内和外圈分单元检测,可避有效免携带污染。结论:检验人员设置程序时,应关注上一个检测试剂中是否含有下一个检测所要测定的物质,必要时调整试剂位置分单元检测等措施,从而避免或减少携带污染的发生。

摘要：目的建立一种新的基于焦磷酸测序技术的HBV前C区／基本核心启动子（pre-C／BCP）突变的检测方法，并验证该方法的准确性、重复性、可靠性及进行初步临床检测。方法通过对基因库中100个HBV基因序列的比对分析，设计出专用的pre-C／BCP焦磷酸测序的PCR扩增引物及测序引物，并以标准质粒作为标准品建立其相应的检测方法。通过对标准质粒及PCR扩增产物、经Sanger测序的HBV血清及基因芯片检测结果分析，以验证本检测方法检测的标本的特异度及本方法的检测可靠性。最后对60例HBV临床血清标本进行了初步的检测。结果本研究成功地建立了pre-C／BCP突变热点的焦磷酸测序方法。其检测结果与pre-C／BCP质粒，Sanger测序法的检测结果符合率达100％（Kappa=1.0），基因芯片检测结果的诊断符合率为91．7％。同一批血清标本的重复率达97．8％，阳性PCR产物测序的重复率100％。充分证明了本方法的准确性、重复性、可靠性。初步批量化检测60份临床标本结果表明，本方法能一次批量检出包括pre-C／BCP的单一、多位点的突变，并发现了一例少见的BCP T1758C突变。结论本实验所建立的pre-C／BCP突变热点的焦磷酸测序方法是一种可一次性检测HBV pre-C／BCP多位点突变的高通量的检测方法。

摘要：目的:应用细菌的16S rRNA/rDNA序列设计引物,PCR检测经益生菌治疗后肠道菌群的相对变化,观察益生菌VSL#3对大鼠实验性结肠炎的保护作用。方法:将24只SD大鼠以三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇溶液一次性灌肠造成急性实验性结肠炎模型,并随机分成3组,即模型组、VSL#3组和5-氨基水杨酸(5-ASA)组,分别给予生理盐水、益生菌VSL#3、5-ASA灌胃。观察各组大鼠一般情况、体重、大便的改变。1周后处死大鼠,观察结肠病理变化,比较每组炎症积分。留取大便样本,分别进行双歧杆菌、大肠杆菌、乳酸杆菌的培养、计数。应用细菌的16S rRNA/rDNA序列设计引物,对大鼠肠道双歧杆菌、大肠杆菌、乳酸杆菌和通用细菌的16S rDNA基因进行PCR检测,并计算前3种细菌16S rDNA基因的相对扩增产物以观察肠道菌群的变化。结果:TNBS造模1周内各组大鼠均出现懒动、食量下降、腹部膨胀、毛色无光泽、体重下降、腹泻、便血的表现。处死后发现每组均有不同程度的结肠、回盲部扩张,局部结肠淤血、与周围组织黏连,肠黏膜有出血点、溃疡甚至糜烂或肠黏膜脱落,以模型组最明显。VSL#3组和5-ASA组的炎症评分显著低于模型组(P<0.05)。经PCR及细菌培养的方法均显示VSL#3组肠道大肠杆菌含量低于另两组(均为P<0.01),而双歧杆菌和乳酸杆菌含量显著高于另两组(P<0.01或P<0.05)。结论:利用细菌16S rRNA/rDNA设计引物,对多种肠道细菌相对含量进行PCR检测,发现益生菌VSL#3可通过调节肠道菌群,达到对大鼠实验性结肠炎的治疗效果。

摘要：背景:大肠癌的发病率呈明显上升趋势。以往的治疗主要为手术治疗、化学治疗和放射治疗。目前基因疗法已应用于大肠癌治疗的临床实践中。目的:构建复制缺陷型重组hp27mt基因腺病毒并检测其在SW480细胞中的表达,探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及突变p27的抗肿瘤特性。设计:非随机对照实验。单位:郧阳医学院附属人民医院消化内科,郧阳医学院临床医学研究所,武汉大学中南医院消化内科。材料:实验于2002-01/2003-09在郧阳医学院临床医学研究所完成。AgeⅠ,NheⅠ,KpnⅠ,PacⅠ和PmeⅠ等限制性内切酶;Tag酶,T4DNA连接酶;Westernblot检测试剂盒;鼠抗人p27kip1多抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG单抗;pORF9-hp27mt质粒,腺病毒骨架质粒pAdeasy-1,穿梭质粒pShuttle-CMV,LacZ重组腺病毒,脂质体,结肠癌细胞株SW480。方法:①hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出,经2次亚克隆,插入到穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-hp27mt;然后再用PmeI线性化的pShuttle-CMV-hp27mt转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的超感受态BJ5183,使其在细菌内发生同源重组。重组质粒鉴定正确后经PacI酶切,转入Ad293细胞,包装成重组腺病毒Ad-hp27mt。采用聚合酶链反应方法对重组腺病毒进行鉴定,用紫外分光光度计进行滴度测定。②用重组p27mt的腺病毒Ad-p27mt感染大肠癌细胞SW480,应用WesternBlot检测p27蛋白的表达。主要观察指标:①腺病毒在Ad293细胞中的包装过程。②Ad-p27mt的聚合酶链反应检测Ad-p27mt转染大肠癌细胞后的p27mt的表达。结果:①用含pShuttle-CMV-hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183后,可获得约30%的阳性重组质粒。②聚合酶链反应检测表明重组腺病毒DNA中含有目的基因。重组腺病毒滴度为7.95×1015pfu/L。③转染大肠癌细胞后,p27在SW480中获得了高表达,而未转染细胞和LacZ重组腺病毒转染的细胞中仅有低表达。结论:复制缺陷重组腺病毒能有效介导突变p27基因在肿瘤细胞内表达,为观察突变p27基因对大肠癌的治疗作用提供了有效的基因转移载体。

摘要：目的:评价双歧三联活菌对三硝基苯磺酸钠(TNBS)诱导的大鼠结肠炎的疗效,并探讨其作用机制.方法:成年♀SD大鼠(n=50),随机分为健康对照组A、未治疗组B、双歧三联活菌治疗组C、奥沙拉秦治疗组D、双歧三联活菌和奥沙拉秦联合治疗组E(n=10).观察大鼠的一般情况,检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、结肠组织TNF-α细胞阳性率,比较结肠组织炎症程度.结果:A组大鼠DAI(P<0.001)、血清TNF-α(P<0.001)水平、肠组织TNF-α细胞阳性率(P<0.05)、肠组织学评分(P<0.05)显著低于未治疗组B;B组大鼠DAI、血清TNF-α水平、肠组织学评分、肠组织TNF-α细胞阳性率最高(P<0.05);3个治疗组C、D、E的大鼠DAI、血清TNF-α、肠组织TNF-α细胞阳性率明显下降,肠组织炎症明显消散,以E组最显著(P<0.05),肠组织TNF-α的表达与结肠炎病情轻重呈正相关.结论:双歧三联活菌能有效治疗TNBS诱导的大鼠结肠炎,其作用机制可能与抑制肠黏膜免疫系统效应细胞TNF-α的表达有关.

摘要：目的:在传统基因芯片技术基础上,应用生物传感器技术,研制一种能将基因芯片信号原位放大后达肉眼判读灵敏度,无需专用基因芯片检测仪器就可使用,易于在基层医疗单位推广的薄膜生物传感器基因芯片诊断系统.方法:在薄膜生物传感器基片基础上,经过表面化学处理,使特定的基因捕获探针在传感器表面固定,形成特定检测目的生物传感器基因芯片.并以乙肝病毒YMDD区的特异序列设计为例,通过特定的YMDD区的捕获探针,以矩阵的形式点样于传感器芯片表面来实现本系统.同时,纳米金标记的检测探针取代了传统芯片中的荧光标记探针.扩增后的目的PCR片段与捕获探针、生物素标记探针、链亲蛋白纳米金探针进行反应,最后得到探针-生物素-链亲蛋白-纳米金复合物,并在芯片表面经生物传感器芯片将信号原位放大,获得肉眼观的芯片信号并进行分析,完成芯片诊断.以乙型肝炎病毒YMDD突变为例,观察该芯片系统对临床诊断标本诊断的可靠性.结果:基因芯片的检测信号经生物传感器原位放大后能肉眼判读或借助普通数码照像机或计算机扫描,根据信号出现的特定位置即可确定突变的类型.且该生物传感器基因芯片系统信噪比高,在人工合成的寡核苷酸及临床血清的检测中,均可实现生物芯片阴阳性信号完全的有或无的判读;临床血清标本检测证实,使用该传感器芯片系统对前期经过测序确定为YMDD突变的23份临床血清结果与测序结果完全一致.结论:薄膜生物传感器基因芯片集纳米材料、生物传感器技术及原位放大技术为一体,实现了信号的肉眼判读,具有通用性高,准确可靠,无需大型设备,易于在基层医疗单位推广使用.

摘要：近年来,椎孔外神经卡压,尤其是神经型胸廓出口综合征(neurogenic thoracic outlet syndrome nTOS)越来越受到人们的关注[1-3]。nTOS、颈椎病、肩周炎是产生颈肩痛的常见原因,不易鉴别,临床上有部分被诊断为颈椎病、肩周炎的患者,经治疗后症状无明显改善,行臂丛神经减压松解或局部封闭治疗后病情显著改善,提示nTOS可能是因臂丛神经干卡压或炎性受累导致疼痛,进而被误诊为颈椎病、肩周炎[4-7]。有研究报道,给予斜角肌注射局部麻醉药物或消炎药可治疗nTOS[8-9]。本研究对nTOS患者采用两阶段自身交叉对照设计,行超声引导下颈部肌间沟注射治疗,评价其临床疗效,并对肌间沟处臂丛神经及其周围超声声像图特征和解剖变化进行观察,报道如下。

摘要：经内镜鼻胆管引流术（ENBD）是在诊断性逆行性胰胆管造影（ERCP）技术的基础上建立起来的,是较为常用的内镜下胆管引流方法.它采用一细长的塑料管经十二指肠乳头插入胆管中,另外一端经十二指肠、胃、试管、咽等从鼻孔引出体外,建立胆汁的体外引流途径.

摘要：目的　探讨湖北汉族人 HL A- DRB1等位基因与大肠癌遗传相关性。方法　针对 HL A- DRB1等位基因第 2外显子多态性 ,设计 2 3对引物的序列特异性引物聚合酶链反应 ,结合等位基因序列分析 ,检测了无亲缘关系的湖北籍汉族健康人 136名及大肠癌患者 72例的 HL A- DRB1基因。 SAS软件进行数据处理。结果　湖北地区汉族人大肠癌患者与正常人比较 ,HL A- DRB1* 0 90 1等位基因分布频率 0 .2 2 92 vs0 .1397(P<0 .0 0 5 ,OR=2 .182 2 ) ,病因分数 0 .2 483;- DRB1* 0 80 X等位基因频率 0 .0 139vs0 .0 80 9(P<0 .0 1,OR=0 .1481) ,预防分数 0 .135 4。提示 HL A- DRB1* 0 90 1、* 0 80 X分别与该地区汉族人大肠癌呈正关联或负关联。两组间 HL A- DRB1其余等位基因分布频率 ,差异均无显著性。结论　 HL A- DRB1* 0 90 1为湖北地区汉族人大肠癌的易感基因 ,而 - DRB1* 0 80 X则为其抵抗基因 ,上述两种等位基因结构得到了等位基因序列分析印证。