摘要：目的观察L型氨基酸转运载体1(LAT1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法设计并合成靶向LAT1的小干扰RNA(siLAT1)和阴性对照小干扰RNA(siCON),并在结直肠癌细胞株HT29中进行转染,48 h后利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测目的基因mRNA和蛋白水平的表达,进行敲降效率的验证.利用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测干扰组(siLAT1组)和阴性对照组(siCON组)细胞增殖,利用Transwell实验检测siLAT1组和siCON组细胞的迁移能力.结果 siLAT1和siCON瞬时转染HT29细胞48 h后,siLAT1对HT29细胞LAT1 mRNA表达的抑制率为(73.2±5.2)%,差异有统计学意义(t=11.410,P<0.01).Western blot结果进一步证实靶向LAT1的小干扰RNA(siRNA)的敲减效率(0.68±0.06比0.21±0.04,t=4.492,P<0.05).CCK-8实验表明LAT1基因敲降后的细胞株HT29增殖能力弱于阴性对照组(P<0.01).Transwell迁移实验表明在转染后siLAT1组迁移细胞数明显小于阴性对照组(66 ±11比156±29,t=5.083,P<0.05).结论 LAT1表达下调抑制了结直肠癌肿瘤细胞的增殖和迁移过程.

摘要：目的探讨基质金属蛋白酶1(MMP1)基因在肝癌组织中的表达及其作用机制。方法利用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库分析MMP1在肝癌组织中的表达及其与患者总体生存时间、无病生存时间之间的关系。设计并合成靶向MMP1的小干扰RNA(siMMP1)和阴性对照siCON,并在肝癌细胞株HepG2(购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)中进行转染,利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测目的基因mRNA的表达情况验证敲降效率。在HepG2中进行siMMP1和siCON转染,利用Transwell实验检测siMMP1组和siCON组细胞的迁移和侵袭能力。两组比较采用Student t检验。生存分析采用Kaplan-Meier方法,组间比较采用Log-rank检验。结果MMP1 mRNA在肝癌中表达水平高于癌旁正常组织(0.248±0.038比0.075±0.010,t=7.566,P<0.05),生存分析表明高表达MMP1 mRNA的肝癌患者较低表达MMP1 mRNA的患者有更短的总体生存时间[风险比(HR)=1.987,95%可信区间(CI):1.623~2.287,P<0.01]和无病生存时间(HR=1.413,95%CI:1.114~1.852,P<0.05)呈负相关。siMMP1和siCON瞬时转染HepG2细胞48 h后,siMMP1对HepG2细胞MMP1 mRNA表达的抑制率为(80.2±5.8)%,差异有统计学意义(t=13.283,P<0.01)。Transwell迁移实验表明在转染后siMMP1组迁移细胞数明显小于阴性对照组[(124±19)个比(243±27)个,t=6.145,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell侵袭实验表明在转染后siMMP1组侵袭细胞数明显小于阴性对照组[(96±7)个比(144±14)个,t=5.334,P<0.05],差异有统计学意义。结论MMP1高表达是肝癌患者预后不良因素,下调MMP1表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。

摘要：目的观察维甲酸诱导2基因(RAI2)表达对胰腺癌生长的作用。方法设计并合成成慢病毒RAI2过表达质粒和阴性对照慢病毒,并在胰腺癌细胞系SW1990中进行慢病毒感染实验建立RAI2过表达细胞株,然后利用荧光定量PCR检测RAI2 mRNA水平的表达验证过表达效率。利用裸鼠皮下移植瘤模型检测RAI2过表达组和阴性对照组细胞的生长,采用Student t检验进行统计学分析。结果慢病毒感染1周后,RAI2过表达组SW1990细胞RAI2 mRNA的过表达率为(87.5±4.9)%,差异有统计学意义(t=-10.281,P<0.01)。裸鼠皮下移植瘤实验表明,与阴性对照组比较,RAI2过表达组肿瘤体积[(112.46±39.24)mm^(3)比(544.85±94.43)mm^(3),t=6.585,P<0.05]和重量[(90.83±46.53)mg比(428.60±112.60)mg,t=7.325,P<0.05]均低于阴性对照组。结论RAI2基因表达上调抑制胰腺癌的生长。