摘要：目的　构建编码弓形虫 RH株 P2 4基因的细胞内定位载体并进行其序列测定。　方法　弓形虫 RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,Trizol试剂盒抽提基因组 RNA;根据基因库 P2 4基因序列设计合成引物 ,采用 RT- PCR法扩增编码P2 4的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将 P2 4基因定向克隆到细胞内定位载体 p CMV/ myc系列 :p CMV/myc/ cyto(胞质定位 )、p CMV/ myc/ nuc(核定位 )、p CMV/ myc/ mito(线粒体定位 )及 p CMV/ myc/ ER(内质网定位 )。转化大肠杆菌 TOP10感受态细胞 ,在氨苄青霉素阳性 L B培养基平板上筛选出阳性克隆。重组子经双酶切 ,PCR鉴定 ,最后对重组子进行序列测定。　结果　 RT- PCR方法从弓形虫 RH株扩增 5 72 bp的 P2 4基因片段 ,分别构建重组质粒p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和 p CMV/ myc/ ER- P2 4 ,酶切和 PCR鉴定产物大小与预期值相符合 ,序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码 P2 4抗原的基因片段。　结论　成功构建编码弓形虫表面抗原 P2 4基因真核细胞内定位载体重组质粒 p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和p CMV/ myc/ ER- P2

摘要：目的　构建编码肿瘤抑制基因 PTEN的正义与反义真核表达重组载体并进行其序列测定。　方法　新鲜胎盘组织抽提基因组 RNA;根据基因库 PTEN基因序列分别设计合成三对反义引物及一对正义引物 ,采用 RT-PCR法扩增编码 PTEN的基因片段 ;将 PTEN基因定向克隆到 pc DNA3.1/ Hygro(- )真核表达载体 ,筛选阳性重组子并鉴定 ;对重组子进行序列测定。　结果　RT- PCR所扩增的 PTEN基因片段为 2 4 1,2 39,2 2 7bp(反义 )及 12 0 9bp(正义 ) ,表明所克隆的基因为编码 PTEN的基因片段。　结论　成功构建编码肿瘤抑制基因 PTEN的 pc DNA3.1/Hygro(- )真核表达质粒 pc DNA3.1/ Hygro(- ) PTEN。