摘要：背景:内皮细胞发生结构损伤和功能障碍的主要特征为内皮细胞活性降低或释放的一氧化氮减少,内皮缩血管肽产生增加。目的:探讨黄芪多糖抗动脉粥样硬化内皮细胞损伤的作用,并以卡托普利做标准对照。设计:随机对照观察。单位:湖北中医学院生理教研室,武汉大学医学院病理生理教研室,广东省荷塘医院外科,武汉大学人民医院内分泌科。材料:实验于2001-07/2002-11在湖北中医学院机能实验室和武汉大学医学院病理生理教研室完成。选择由武汉大学医学院实验动物中心提供的健康国产雄性家兔40只,体质量2.4～3.0kg,随机分为空白组、模型对照组、黄芪多糖组、卡托普利组(标准对照),10只/组。黄芪多糖从山西产黄芪根中提取,制成注射用粉剂,用前以生理盐水新鲜配制。方法:空白组给予正常颗料饲料,其余3组从实验第1天起给予高脂饲料(80%基础饲料中加入15%蛋黄粉、0.5%胆固醇和5%猪油),牛血清1mL/kg从耳缘静脉注射1次,用高脂饲料加免疫损伤建立兔动脉粥样硬化内皮细胞损伤模型。黄芪多糖组每天腹腔注射黄芪多糖500mg/kg;卡托普利组给予5mg/kg卡托普利,相当于临床剂量的5倍;空白组、模型对照组给予等体积的生理盐水4mL/kg,共给药50d。末次给药后24h,从上腔静脉取血后处死动物,腹主动脉形态学变化光镜下观察,并测定家兔血清中总胆固醇、三酰甘油、一氧化氮、内皮缩血管肽、超氧化物歧化酶、丙二醛、总抗氧化活力的变化。主要观察指标:①腹主动脉形态学变化。②血清中各项相关指标变化检测。结果:40只家兔全部纳入实验。①与模型对照组比较,黄芪多糖组和卡托普利组血清中总胆固醇、三酰甘油含量明显降低[(9.33±1.13),(6.60±0.61),(7.09±0.74)mmol/L,P<0.05;(3.05±0.44),(1.26±0.16),(2.17±0.46)mmol/L,P<0.01,P<0.05];且丙二醛和内皮缩血管肽含量也明显降低[(9.98±1.11),(7.10±0.68),(9.46±1.27)μmol/L,P<0.01;(741.90±34.98),(632.62±26.95),(600.74±32.59)ng/L,P<0.01]。②与模型对照组比较,黄芪多糖组和卡托普利组血清中一氧化氮、超氧化物歧化酶含量显著提高[(11.04±1.68),(19.96±6.05),(18.35±3.52)μmol/L,P<0.01,P<0.05;(159.32±5.26),(207.54±16.98),(197.59±28.41)NU/mL,P<0.01,P<0.05];同时总抗氧化活力升高[(23.8±3.5),(34.7±5.6),(30.7±6.8)%,P<0.01,P<0.05]。③黄芪多糖组无论是血清中总胆固醇、三酰甘油及丙二醛含量的降低或一氧化氮、超氧化物歧化酶及总抗氧化活力的升高均优于卡托普利组(P<0.01)。④腹主动脉形态学变化观察结果,可见空白组腹主动脉内膜表面光滑,内皮细胞连续,细胞间隙较小,内皮细胞无水肿,形态正常;模型对照组腹主动脉内膜增厚、隆起,血管内皮细胞可见部分脱落,细胞间隙增宽,内皮细胞有水肿。中膜层明显增厚,平滑肌细胞增生明显,且迁入内皮下,可见泡沫细胞;黄芪多糖组腹主动脉内膜表面基本光滑,细胞连接较紧密,平滑肌细胞增生不活跃,泡沫细胞少见;卡托普利组腹主动脉内膜表面基本光滑,内皮细胞无明显脱落,无平滑肌细胞迁入,平滑肌细胞形态基本正常,排列规则。结论:黄芪多糖可明显降低血清中总胆固醇、三酰甘油、丙二醛和内皮缩血管肽的含量,从而减轻内皮缩血管肽对血管的损伤作用;同时升高一氧化氮、超氧化物歧化酶及总抗氧化活力,应用黄芪多糖家兔光镜下可见腹主动脉内膜表面基本光滑,内皮细胞形态基本完好,提示其具有较好的对抗氧化损伤和保护血管内皮细胞的功能。

摘要：目的探讨亚低温对创伤性脑水肿后脑保护各影响因素间的关系与最佳组合。方法制作兔创伤性脑水肿模型,采用正交设计法,测量了64例在不同的低温温度、治疗时间窗和低温持续时间等条件下脑组织腺苷酸含量;并对208例重型脑损伤病例实施低温治疗,按Jennet分级标准和颅内压计分。结果亚低温对实验兔脑保护的最佳组合条件为30～33℃、伤后4～8h低温、持续48h效果较好。临床研究结果在33.5～35.5℃、12h内开始亚低温治疗、复温后维持36℃达72h以上者疗效满意。结论对脑损伤后亚低温治疗影响因素进行最佳组合,可以使脑得到较好的保护效果。

摘要：目的:针对PP2A内源性抑制剂SET基因的不同部位,构建靶向SET的shRNA真核表达质粒,鉴定并筛选出最佳抑制效率的表达质粒.方法:针对SET基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到真核表达载体pGPU6中,构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4.利用脂质体转染人胃癌细胞株BGC-823,Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA表达质粒.结果:4个靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4经限制性酶切和测序证实基因已正确插入,荧光显示转染效率可达到80%以上.Western blot法证实pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-3明显降低BGC-823细胞内SET蛋白的表达.pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-3对SET蛋白表达的抑制效应在72h达到最强.结论:成功构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4,并筛选出最佳抑制效率的表达质粒,为今后研究SET在胃癌中的作用机理奠定了基础.

摘要：目的 :分析p6 2 dok氨基酸和cDNA序列 ,探讨p6 2 dok酪氨酸磷酸化及其与p2 1ras鸟苷三磷酸酶激活蛋白(p2 1rasGAP)的关系。方法 :从过渡表达人类胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞 (CHO/IR细胞 )中提取、纯化p6 2 dok,进行微肽序列分析 ,设计相应引物PCR、克隆cDNA并测序。利用免疫沉淀和蛋白免疫印迹检测p6 2 dok是否存在酪氨酸磷酸化及与p2 1rasGAP的关系。结果 :p6 2 dokcDNA由 186 3bp组成 ,编码 481个氨基酸 ,含 15个酪氨酸残基 ,富PXXP基序 ,并有一个pleckstrin同源区。当p6 2 dok酪氨酸磷酸化后 ,可与p2 1rasGAP相结合。结论 :p6 2 dok可能是一种新的信息分子 ,并通过p2 1rasGAP参与胰岛素信号转导系统中RAS/MAPK径路的调节。