摘要：目的运用实时荧光定量PCR法检测日本血吸虫。方法根据日本血吸虫18S小亚基单位核糖体核酸(18SrRNA)基因设计特异性引物,PCR扩增出1450bp序列,经TA克隆后转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为模板制作荧光定量PCR标准曲线。方法重现性评价,用初始循环数(Ct,拷贝/反应)进行标准差分析,并计算变异系数(CV)。结果制作的标准曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9987。方法重现性评价,在1.05×107～1.05×103个拷贝范围内,对应的Ct平均值分别为17.55、20.93、24.32、27.59和30.95;CV值分别为1.31%、1.53%、0.90%、1.85%及0.90%,在重复性试验中试验间数据平均变异系数为1.27%,无非特异性扩增。在试验检测范围内(Ct≤30.95),可检测的日本血吸虫基因组浓度为6.15pg,3h内完成。结论运用荧光定量PCR方法检测日本血吸虫DNA,快速、灵敏、特异性高。

摘要：目的诱导小干涉RNA (small interference RNA, siRNA )对阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白家族性瑞典型突变(APPswe)的沉默作用。方法设计一对针对APPswe的寡核苷酸,构建成内源性表达相应siRNA的质粒,与构建的APP-EGFP重组质粒瞬时共转染COS-7细胞,利用GFP报告基因来间接观察siRNA对APPswe的沉默作用。结果siRNA可有效地下调突变型APP,相比APPwt而言,针对突变型APP的siRNA对APPswe的沉默作用更强。结论针对APPswe的siRNA可有效地沉默APPswe基因,并有一定的等位基因特异性。因此,针对APPswe的siRNA将在阿尔茨海默病治疗研究领域扮演重要角色。

摘要：目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用。方法将设计好的一对寡核苷酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带2个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFPAPP重组质粒;利用EGFP作为报告基因,在COS7细胞内通过共转染siRNA表达质粒和GFPAPP重组质粒来观察沉默效应。结果针对APP的siRNA可有效地下调APP基因。结论针对APP的siRNA将不仅在研究APP基因功能和深入研究阿尔茨海默病(AD)的病理分子机制上,而且在运用siRNA这种新型的反义核酸药物治疗AD方面扮演重要角色。