摘要：斑点叉尾鮰、半滑舌鳎和低眼无齿巨鲶在肉质和产品形态上十分相似,相互难以区分,市场上商品名称混乱,进出口货物中标签和实物不符等现象屡有发生。本实验根据3种鱼的保守基因序列,设计并筛选出3对特异性重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)的引物和探针,建立了基于实时荧光RPA技术的斑点叉尾鮰、半滑舌鳎和低眼无齿巨鲶的物种成分快速检测方法,并对方法进行特异性和灵敏性分析。结果表明,建立的实时荧光RPA检测方法具有较好的特异性和灵敏性,且简单、快速,整个扩增时间仅需20 min,为相关产品的物种成分鉴定提供了快捷、准确的检测依据。

摘要：[目的]为完善我国转基因检测方法体系,建立转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,PCR)检测方法。[方法]根据MON87751的3′端邻接区序列设计特异性引物和探针,建立MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法,并测定该方法的灵敏度、特异性及可重复性。[结果]灵敏度测试显示,其定量下限为40拷贝;重复性试验显示其相对标准偏差在可接受范围内。[结论]该研究建立的MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法特异性良好,灵敏度高,有良好的可重复性,适合对转基因大豆MON87751品系进行检测鉴定。

摘要：为了解进口美国种猪中获取的猪圆环病毒3型(PCV3)毒株全基因组序列及遗传变异情况,根据GenBank中收录的PCV3基因组序列,设计2对特异性引物,对确诊感染PCV3的病死猪组织进行全基因组序列扩增、拼接、测序和序列分析。结果显示,获得的PCV3美国毒株(命名为PCV3_USA2021,GenBank登录号OL799306)全基因组序列长度约为2000 bp,与国内外不同地区的38个PCV3参考毒株同源性为98.7%~99.8%。其中,PCV3_USA2021株开放阅读框ORF1和ORF2与国内外38个参考毒株同源性分别为99.1%~99.9%和98.0%~100%。构建的全基因组系统进化树显示,该毒株为PCV3a亚型,与美国毒株(PCV3-US_SD2016)亲缘关系最近。本研究为PCV3的遗传变异、流行病学分析提供了参考,也为相关疫苗的研制打下了基础。

摘要：大豆南方茎溃疡病是一种世界上危害严重的大豆病害,其病原菌(Diaporthe aspalathi)被列入我国进境植物检疫性有害生物名录。本文基于ITS序列差异设计引物和探针,建立了D. aspalathi常规PCR和荧光PCR检测方法。测试结果表明,常规PCR引物DM-F/DM-R3扩增33个供试菌株,6个D. aspalathi菌株出现394 bp的预期扩增条带,其余供试菌株均无目的条带,检测灵敏度为5 pg菌丝体DNA。探针DM-Pro仅对6个D. aspalathi菌株表现为阳性,其余供试菌株均为阴性,检测灵敏度为500 fg菌丝体DNA。同时,采用这两种方法对进境大豆种子及植株残体等样品进行了验证。以上结果表明,这两种检测方法具有快速、准确、灵敏等优点,可应用于口岸对大豆南方茎溃疡病菌的检疫鉴定及疫情监测。

摘要：我国是水产品生产、贸易和消费大国,近年来随着人们生活水平的不断提高,斑点叉尾鮰、龙利鱼和巴沙鱼等水产品的消费量逐年增大,进出口贸易量持续增加。这几种水产品主要以加工鱼片的形式进行贸易,在肉质和外观形态上都极其相似,难以辨认,市场上以次充好和国外贸易技术壁垒事件层出不穷。本实验根据3种鱼的特异性保守基因,设计合成3对特异性引物和探针,建立了斑点叉尾鮰、半滑舌鳎和低眼无齿巨鲶三重荧光PCR鉴定方法,然后进行PCR反应特异性和灵敏性验证。

摘要：为建立十足目虹彩病毒1的快速检测方法,根据十足目虹彩病毒1的ATP酶基因(ORF114R)保守序列设计特异性引物,通过条件优化,建立基于重组酶聚合酶扩增技术的十足目虹彩病毒1检测方法。重组酶聚合酶扩增技术的最优扩增温度为30 ℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试验结果显示,该方法与其他常见虾类感染病毒无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法对十足目虹彩病毒1的最低检出限为7 拷贝/μL,低于传统的巢式PCR方法。利用已建立的重组酶聚合酶扩增技术方法和PCR方法对采集的509批临床样品进行检测,试验结果表明,重组酶聚合酶扩增技术能够有效检出PCR方法的弱阳性样品,表明重组酶聚合酶扩增技术可以用于临床检测。笔者建立的检测十足目虹彩病毒1的重组酶聚合酶扩增技术具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的特点,适合基层实验室及现场检测。

摘要：线鳢(Channa striata)是东南亚广泛养殖的一种高经济价值淡水肉食性鱼类,但中成鱼阶段(体质量>100 g)线鳢的基础营养需求研究尚处于空白阶段。本研究首先通过添加不同水平鱼粉,设计6组等脂的蛋白梯度实验饲料,探索中成鱼阶段线鳢(初始体质量约150 g)的最适蛋白需求量。养殖实验持续8周,每日两餐饱食投喂。结果显示,当饲料脂肪含量为15%时,随着饲料蛋白含量从36%升高到51%,线鳢的生长性能和饲料效率先升高后趋稳定,而蛋白沉积率则先升高后降低。回归模型拟合增重率和蛋白沉积率,获得中成鱼阶段线鳢对饲料蛋白的最适需求量分别为41.5%和42.3%。在获得最适蛋白需求的基础上,通过添加不同水平的大豆磷脂油,设计6组等氮的脂肪梯度实验饲料,研究中成鱼阶段线鳢(初始体质量约150 g)对饲料中脂肪的最适需求量。养殖实验持续8周,每日两餐饱食投喂。结果显示,当饲料蛋白含量为42%时,随着饲料脂肪从9%升高到19%,线鳢的生长性能和饲料效率先升高后趋稳定,而脂肪沉积率则先升高后降低。回归模型拟合增重率和蛋白沉积率,获得中成鱼阶段线鳢对饲料脂肪的最适需求量分别为15.2%和15.3%。综上,中成鱼阶段线鳢对饲料蛋白和脂肪的最适需求量分别为41.5%~42.3%和15.2%~15.3%。

摘要：向日葵茎溃疡病菌(Diaporthe helianthi)是我国进境植物检疫性病原真菌。本研究针对***的cal基因保守序列设计特异性引物,建立该病菌的重组酶聚合酶扩增检测技术(RPA)方法,并对其特异性、灵敏度及适用性进行评价。结果显示,建立的RPA方法特异性强,只有3个***样品能够检测到234 bp的目的片段;方法灵敏度达到0.1 ng/μL;从模拟带菌的种子中也能够成功检测到目标扩增片段。本研究建立***的RPA检测方法具有较高的特异性和灵敏度,能够直接应用于种子带菌检测,适用于口岸进境向日葵籽的现场快速检测。

摘要：课程设计是教师对课程的预见性思考与规划,是课程实施的前提条件。在“金课”建设及线上教学背景下,开展“女下装结构设计”课程建设探索具有重要意义。基于FD-QM高等教育在线课程质量标准,坚持“以学为中心”的理念,贯彻课程设计的一致性原则,实现学习目标、学习活动、学业考评三大核心标准的协调一致,提高课程设计的可操作性和整体性,为新形势下高校课程建设提供参考。

摘要：【目的】建立检测虾虹彩病毒(SIV)的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,为实现虾虹彩病毒病(SIVD)快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段。【方法】根据SIV的MCP基因保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,将目的片段克隆至pMD18-T载体制备重组质粒pMD18-T-MCPSIV;优化反应体系及扩增条件后建立检测SIV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR,以pMD18-T-MCPSIV为标准品绘制标准曲线,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性。【结果】制备的重组质粒(pMD18-T-MCPSIV)DNA稳定性好,满足作为标准品的要求;标准品起始模板范围为2.0×101~2.0×109拷贝/反应时,建立的标准曲线具有良好线性关系。优化后的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR灵敏度高,对重组质粒的检测灵敏度可达20拷贝/反应,对虾组织SIV的检测灵敏度约10拷贝/mg,其临床检测的敏感性与套式PCR相当;与虾类其他常见病原无交叉反应,组内和组间变异系数分别为0.27%~0.54%和0.61%~0.95%,且扩增与产物分析同步完成,整个检测过程仅需1 h左右。采用建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR与目前农业农村部推荐的套式PCR同时对276份临床虾样品进行SIV检测,结果显示,两种方法的大部分检测结果一致,符合率为98.6%,但检测低拷贝数样品时前者具有更高的灵敏度。2018和2019年广西虾样品的SIV阳性检出率分别为19.7%和7.5%,且养殖凡纳滨对虾、罗氏沼虾和红螯螯虾均检测到SIV阳性。【结论】基于SIV MCP基因保守序列建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、定量范围宽及简单快速等优点,适用于虾类样品SIV检测,可为SIVD快速诊断及疫情监测提供一种新的技术手段。