摘要：目的探讨逆转录病毒介导的RNA（shRNA）干扰迁移诱导基因-7（Mig-7）联合重组人血管内皮抑素（ES）对人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长、转移的抑制作用。方法设计2条Mig-7-mRNA寡核苷酸序列（Mig-7-shRNA-1、Mig-7-shRNA-2）和1条作为负对照的无关序列（Mig-7-shRNA-N）。构建特异性M迫-7-shRNA逆转录病毒表达载体质粒，转染Mig-7高表达人肝癌细胞MHCC-97H。建立人肝细胞癌（HCC）裸鼠皮下移植瘤模型，根据转染情况和给药不同分为4组：pSIREN-M1组；pSIREN-MN组；ES组；pSIREN-Ml＋ES组。比较各组移植瘤体积、质量、转移情况；免疫组织化学观察各组移植瘤中血管生成拟态（VM）形成及肿瘤微血管密度（MVD）的差异；Westernblot检测各组Mig-7及血管内皮生长因子（VEGF）的表达。组间比较采用单因素方差分析，计量资料的组间比较采用Fisher精确概率法检验。结果PSIREN-M1组移植瘤体积、质量、转移率、Mig-7表达及VM形成明显低于PSIREN-MN组（尸〈0．05），VEGF表达及MVD明显高于PSIREN-MN组（P〈0．05）；ES组移植瘤体积、质量及转移率、VEGF表达及MVD明显低于PSIREN-MN组（P〈0．05），Mig-7表达及VM形成明显高于PSIREN-MN组（P〈0．05）；DSIREN-Ml＋ES组的移植瘤体积、质量及转移率、Mig-7表达与VM形成、VEGF表达与MVD明显低于PSIREN-M1组及ES组（P〈0．05）。结论Mig-7-shRNA重组逆转录病毒联合ES抑制HCC移植瘤生长及转移的效果明显优于两者单用。体内单用靶向肿瘤血管内皮细胞的“抗肿瘤血管生成治疗”效果有限的原因可能是其促进了VM的形成。

摘要：【目的】构建pCMV6-Entry p62真核表达质粒,并将其转染至人乳腺癌细胞株MCF-7中,通过抗生素筛选构建高表达p62的稳定细胞系。【方法】以293ET细胞cDNA为模板,设计引物扩增p62基因片段,双酶切扩增出的目的基因片段及pCMV6-Entry Vector空载体,将酶切后的片段进行连接,转化构建质粒,酶切及测序验证;将构建好的质粒转染入MCF-7细胞株中,G418筛选稳定表达细胞株,并用实时定量PCR和Western blotting进行验证。【结果】酶切及测序结果证实成功构建pCMV6-Entry p62真核表达质粒;实时定量PCR结果显示,与对照组相比,转染p62的MCF-7稳定细胞中p62 mRNA的表达显著升高;Western blotting检测Flag及p62蛋白表达显示,在转染p62的MCF-7稳定细胞检在62 kd位置测到Flag阳性条带,对照组则没有阳性条带。在转染p62的MCF-7稳定细胞中p62蛋白的表达较对照组显著升高。【结论】成功构建了pCMV6-Entry p62真核表达质粒,并成功建立高表达p62的MCF-7稳定细胞系。

摘要：目的探索端粒酶反转录酶(hTERT)基因表达情况及启动子区甲基化状态在胃癌形成过程中的变化情况。方法提取正常胃黏膜、胃癌前病变和胃癌3组组织样本的基因组DNA。用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增其hTERT基因,用琼脂糖凝胶电泳检测3组组织样本中hTERT基因表达的阳性率;用亚硫酸氢盐修饰上述各组标本DNA,然后检测修饰后的hTERT序列:启动子区CpG位点,未发生甲基化的胞嘧啶(C)变为尿嘧啶(U);在启动子区不含CpG位点的位置,进行引物设计,然后利用PCR进行扩增。扩增产物序列与原序列比对,观察启动子区甲基化情况。结果 hTERT基因在胃癌组表达的阳性率最高,在癌前病变组表达的阳性率明显降低,而在正常胃黏膜组中不表达,3组组织样本hTERT表达阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。hTERT启动子区甲基化程度在胃癌组中最高,在胃癌前病变组中明显降低,而在正常胃黏膜中甲基化程度最低,3组组织样本hTERT启动子区甲基化程度比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 hTERT启动子区甲基化程度在正常胃黏膜、胃癌前病变和胃癌中依次升高,故hTERT启动子区甲基化程度的变化可作为胃癌形成过程中肿瘤早期诊断的潜在分子生物学标志。

摘要：目的合成1-苯基-3-甲基-4-甲基苯甲酰基-5-吡唑啉酮(HPMTP)缩L-苯丙氨酸乙酯席夫碱及其Cu(Ⅱ)、Co(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)、Fe(Ⅱ)、Mn(Ⅱ)金属配合物,并对合成的化合物进行结构表征和抑菌活性检测。方法通过元素分析、核磁(1H NMR)和红外光谱(IR)对合成化合物进行结构表征检测,采用琼脂扩散法测定化合物对大肠杆菌(革兰阴性菌)和枯草芽孢杆菌(革兰阳性菌)的抑菌活性。结果由1H NMR和IR数据推断出席夫碱配体及其金属配合物可能的结构;发现在1.25、2.50、5.00 g·L-1时,HPMTP、HPMTP缩L-苯丙氨酸乙酯席夫碱及其金属配合物对革兰阳性/阴性菌都具有抑制活性,其中浓度为2.50 g·L-1时抑菌效果最佳。抑菌能力的强弱是金属配合物>席夫碱配体>HPMTP,其中Cu(Ⅱ)和Co(Ⅱ)配合物的活性最高。结论 Cu(Ⅱ)和Co(Ⅱ)配合物具有进一步研究开发为广谱抗菌药物的潜力。

摘要：【目的】合成1-苯基-3-甲基-4-对氯苯甲酰基-5-吡唑啉酮(PM4Cl BP)缩甘氨酸甲酯席夫碱,对其结构进行表征,并探讨其形成金属配合物的可能性及产生抗菌活性的可能机制。【方法】采用羰胺缩合法合成目标化合物,通过元素分析、核磁和红外光谱进行结构表征;运用Gaussian03程序,使用HF、DFT方法及相应基组进行量子化学计算,得到相关的量化参数。【结果】根据元素分析、1HNMR、IR波谱分析结果,推测此化合物以O=C-C=C-NH烯胺酮式结构存在。量子化学计算表明:占有轨道的贡献主要来源是C、N原子,空轨道的贡献主要来源于C、O、N原子;静电势最强的是1Cl,其次是2O,3O和4O,5N、6N和7N的电子密度相近。【结论】该化合物的抑菌活性可能是PM4Cl BP与甘氨酸甲酯两部分共同作用的结果,其中PM4Cl BP是影响活性的主体;而能够与金属离子形成配位的原子可能是2O、3O和7N。