摘要：目的 优化百药煎的纯菌种发酵工艺,以实现百药煎质量稳定、可控,保证临床应用安全、有效,为国家及地方炮制规范提供技术支持。方法 收集根霉曲、宝山酒曲、中药特曲、红薯酒曲和安琪酿酒曲;采用酒曲发酵百药煎,以百药煎中没食子酸含量和外观性状为指标,筛选最佳发酵酒曲;从筛选出的酒曲分离发酵优势菌种,采用显微形态学及分子生物学方法对菌种进行鉴定;采用L_9(3~4)正交设计,以发酵温度、发酵时间、菌种接种量作为考察因素,以百药煎中没食子酸、(-)-表没食子儿茶素、没食子酸甲酯、2,4,6-三-O-没食子酰-α-D-葡萄糖、2,4,6-三-O-没食子酰-β-D-葡萄糖的含量作为考察指标,采用主成分分析(principal component analysis,PCA)法对5种成分进行综合评价,以计算出的总因子得分(F)为综合指标,对百药煎的纯菌种发酵工艺进行优化。结果 5种酒曲发酵百药煎中没食子酸质量分数分别为14.41%、13.73%、9.41%、9.78%、7.16%,根霉曲发酵百药煎表面长有白色菌丝,与传统发酵百药煎性状最接近。从根霉曲中分离出1个菌种,菌丝无隔膜,具分枝和假根,顶端有孢子囊,孢子囊近似球状,孢子呈球形或近似球状;测序结果通过BLAST与NCBI(***)Gen Bank数据库中的菌株序列进行比对,结合传统的形态学鉴定和分子生物学鉴定,最终鉴定结果为米根霉Rhizopus oryzae。正交法优化米根霉发酵百药煎最佳工艺为每五倍子粉末100 g,加绿茶叶10 g,茶叶加15倍量蒸馏水煎煮20 min,煎煮3次,过滤,合并滤液,浓缩约100 mL;将茶渣、适量茶汁与五倍子粉混合均匀制软材,使软材含水量约45%,并于115℃高压蒸汽灭菌锅中灭菌30 min,放凉;接种9%浓度为1×10^(8)个/mL的米根霉孢子混悬液,在温度34℃、湿度85%的条件下发酵时间52 h,取出,烘干。5种成分没食子酸、(-)-表没食子儿茶素、没食子酸甲酯、2,4,6-三-O-没食子酰-α-D-葡萄糖、2,4,6-三-O-没食子酰-β-D-葡萄糖含量高。结论 纯菌种米根霉发酵的百药煎工艺稳定,可以为纯种发酵百药煎的规范化的生产提供依据和指导。