摘要：目的构建hi FGF2(high molecular weight isoform fibroblast growth factor-2,hi FGF2)真核表达载体,并观察其过表达后对细胞凋亡的影响。方法设计合成hi FGF2 cDNA模板引物,Nhel和Hind III双酶切pDsRed1-N1质粒,T4DNA连接酶重组hi FGF2质粒,PCR扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳检测及测序鉴定。将重组hi FGF2质粒瞬时转染HEK293细胞,荧光倒置显微镜检测转染效率。AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 hi FGF2真核表达载体符合设计要求,瞬时转染HEK293细胞的转染率达70%以上。过表达hi FGF2,HEK293细胞FITC/PI双染阳性率达(29.12±2.81)%,与正常组、转染空载体组差别有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论成功构建hi FGF2真核表达载体,过表达hi FGF2导致细胞凋亡。

摘要：目的了解鲍曼不动杆菌中SHV型β内酰胺酶的基因型及其耐药性。方法采用纸片扩散法(K-B法)测定5株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的敏感性;设计SHV型β内酰胺酶引物,采用PCR法获得SHV型酶编码基因的片段,并将PCR扩增产物克隆入pMD18-T载体,以双脱氧链终止法测定核苷酸序列,确定亚型。结果药敏试验结果显示:5株鲍曼不动杆菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢西丁、头孢他啶和氨曲南均耐药。3株菌SHV基因型扩增结果呈阳性,其中2株与SHV-12的序列100%相同,另1株(No-03)经GenBank网上同源性比较,未发现完全相同的核苷酸和氨基酸序列,为一种新发现的SHV亚型β内酰胺酶耐药基因,其序列以SHV-71的名称在美国核酸数据库GenBank成功登录(GenBank注册号:DQ296194)。结论临床分离的鲍曼不动杆菌No-03株所产SHV型BLA为一种新SHV亚型β内酰胺酶。

摘要：近年来,我院在七年制学生中开展了探索性实验教学,教学过程中学生在实验设计、实验实施、数据分析和论文书写方面还存在不少问题。改进机能学和探索性实验的教学方法,建立合理的考核评价体系,将有助于提高探索性实验课程的教学质量。

摘要：目的:应用均匀设计法,定量分析海滩牵牛中东莨菪亭和橙皮素联用对冰醋酸所致小鼠扭体实验的镇痛效果。方法:设置5个水平的东莨菪亭(S)和橙皮素(H)联用比例和剂量,采用冰醋酸致小鼠扭体模型,观察不同组合的镇痛效果,综合数理分析结果,确定最优配方。结果:联合使用橙皮素194.5mg/kg和东莨菪亭15.36mg/kg对冰醋酸所致小鼠扭体实验可达到最佳的抑制作用。最佳剂量范围,H:175～215mg/kg;S:14～17mg/kg。结论:本实验采用均匀设计法确定了海滩牵牛中东莨菪亭和橙皮素联用对冰醋酸所致小鼠扭体实验的镇痛效果的最佳配比。均匀设计法可用于多药物联用的定量分析,但有一定的局限,其结果需经实验确证。

摘要：目的:快速鉴定新生仔鼠的性别。方法:根据GenBank上Sry核酸序列,设计小鼠mSry引物。双盲法对12只新生仔鼠(<7 d龄)及已知性别雄性小鼠抽提鼠尾组织DNA,并进行PCR性别鉴定。结果:雄性仔鼠尾组织DNA样品中扩增出1条189 bp的DNA片段,雌性仔鼠DNA样品没能有效扩增出特异的Sry片段。结论:利用PCR检测鼠尾中的mSry是一简便快捷、有效的新生仔鼠早期性别鉴定手段。

摘要：在甾体的甾核或者支链上引入不同的官能团后可以得到不同生理活性的化合物,它们有可能会成为人类治疗不同疾病的药物。甾体药物除了作为传统激素类药物使用外,在抗肿瘤药物中的应用也成为甾体的重要研究内容之一。含有氮杂环官能团的甾体化合物是一类具有显著生理活性的化合物。本文按照氮杂环基团在甾体母核中的不同取代位置而具备不同的抗肿瘤活性进行讨论,概述了近5年来新合成及新发现的氮杂环甾体化合物的设计、筛选,以及在抑制肿瘤细胞生长增殖活性方面的研究,并对其发展趋势和应用前景进行了展望。

摘要：目的:研究白花马鞍藤的有效成分(橙皮素,秦皮乙素,伞形香豆素和姜黄素)联用效果及各成分间的最佳配比剂量。方法:用巴豆油致小鼠耳肿胀模型,研究4个有效成分的量效关系;用均匀设计法研究4个有效成分联用对小鼠耳肿胀的抑制作用。结果:4个单体均能抑制巴豆油所致小鼠耳肿胀,部分呈量效-依赖关系;姜黄素和橙皮素在均匀设计合用中发挥主要作用;4个单体的最佳配比剂量依次为800、200、800、115 mg/kg;验证性实验结果与实验拟合的结果无统计学意义。结论:均匀设计法分析多药物联用可行。

摘要：目的:建立同时测定大鼠血浆中替格瑞洛与美托洛尔浓度的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法,并应用该方法考察对大鼠重复给药后替格瑞洛与美托洛尔的药代动力学影响。方法:SD大鼠随机分为3组,分别为2个单给药组和1个联合给药组。大鼠行颈静脉埋管手术后48 h,分别灌胃给药替格瑞洛、美托洛尔以及合并用药。给药1周后按设计时间点经颈静脉埋管取血,获取血浆样品。血浆样品用甲醇沉淀蛋白后,采用C18色谱柱,以乙腈-水溶液为流动相进行梯度洗脱,使用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪,多重反应监测模式,电喷雾离子化源,正离子反应进行监测。结果:(1)替格瑞洛和美托洛尔的线性范围分别为6.51~800 ng/mL(R=0.9998),6.51~800 ng/mL(R=0.9995),线性关系良好,样品提取回收率均大于85%,批间与批内精密度均小于15%;(2)两药合用,替格瑞洛的达峰浓度、药时曲线下面积比单用时明显增加,清除率明显减少;美托洛尔的半衰期缩短。结论:建立的同时测定替格瑞洛与美托洛尔的LC-MS/MS方法,稳定性好,准确性高,操作简便;替格瑞洛与美托洛尔联合用药,使替格瑞洛的生物利用度升高,美托洛尔的t下降。

摘要：目的:研究组织因子(TF)反义寡脱氧核苷酸(AS/TF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。方法:设计针对大鼠TF的AS/TF、正义寡脱氧核苷酸(S/TF)和错配寡脱氧核苷酸(Sc/TF)。50只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、反义寡脱氧核苷酸防治组(AS/TF组)、正义寡脱氧核苷酸防治组(S/TF组)和错配寡脱氧核苷酸防治组(Sc/TF组),每组10只。Sham组和I/R组大鼠经静脉注入生理盐水,AS/TF组、S/TF组和Sc/TF组大鼠分别注入AS/TF、S/TF和Sc/TF。于注射后10h麻醉大鼠,开胸暴露心脏,于冠状动脉左前降支中1/2处穿线,Sham组只穿线不结扎,其余4组均结扎造成心肌缺血,90min后解除结扎,再灌注1h。用ELISA检测大鼠血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、血浆凝血酶鄄抗凝血酶复合物(TAT)和血小板P鄄选择素的含量。Northern印迹杂交检测大鼠缺血区心肌组织中TF基因的转录,HE染色观察缺血区心肌组织的病理变化。结果:大鼠心肌缺血再灌注后,血清cTnI、血浆TAT和P鄄选择素含量明显上升(P<0.001),AS/TF组的上升幅度低于I/R组、S/TF组和Sc/TF组(P<0.05)。Northern印迹杂交显示大鼠缺血区心肌组织TF基因的转录明显增强,AS/TF组TFmRNA的转录弱于I/R组、S/TF组和Sc/TF组。HE染色可见大鼠缺血区心肌组织有灶性坏死。

摘要：目的研究反义寡脱氧核苷酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧再复氧损伤后组织因子(TF)基因转录和表达的影响。方法培养的HUVEC随机等分成为正常对照组、缺氧再复氧组、反义寡脱氧核苷酸转染组(AS/TF组)、正义寡脱氧核苷酸转染组(S/TF组)和错配寡脱氧核苷酸转染组(Sc/TF组)。设计合成针对人TF的反义寡脱氧核苷酸(AS/TF),同时设计TF的正义寡脱氧核苷酸(S/TF)的错配寡脱氧核苷酸(Sc/TF)作为对照。用SuperFectTransfectionReagent(SF)作载体,将AS/TF、S/TF和Sc/TF分别转染AS/TF组、S/TF组和Sc/TF组HUVEC,正常对照组和缺氧再复氧组HUVEC只加SF,不转染任何寡核苷酸。将缺氧再复氧组、AS/TF组、S/TF组和Sc/TF组HUVEC培养24h后,充入氮气,缺氧条件下培养2h,正常条件下培养1h,完成缺氧再复氧模型的制作。收集各组HUVEC,用发色底物法检测HUVEC表面TF的活性,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HUVEC中的TF抗原(TF:Ag)。并用膨胀裂解法分离细胞核,进行细胞核连缀反应(Run-onreaction)后,Bio-dot狭线印迹杂交检测HUVEC中的TFmRNA。结果与未经缺氧再复氧的正常对照组HUVEC相比,经过缺氧再复氧的HUVEC表面TF活性明显增强(P<0.001),细胞裂解液中的TF:Ag也显著增多(P<0.001),AS/TF组HUVEC的TF活性和TF:Ag的增加幅度低于缺氧再复氧组、S/TF组以及Sc/TF组(P<0.05-0.01)。体外细胞核连缀反应后,Bio-dot狭线印迹杂交显示,HUVEC缺氧再复氧后TF基因的转录增强,AS/TF组HUVECTFmRNA的转录弱于缺氧再复氧组、S/TF组和Sc/TF组。结论HUVEC缺氧再复氧后,TF基因的转录和表达均显著增强,针对TF的反义寡脱氧核苷酸能够明显抑制HUVEC缺氧再复氧损伤后TF基因的转录和表达。提示TF反义寡脱氧核苷酸对于因TF水平升高所致的血栓性疾病可能有潜在的治疗作用。