摘要：设计了以“菊苣酸体外抑制氧化应激的药效学评价”为主题的细胞生物学开放性综合实验。以LPS诱导巨噬细胞RAW264.7构建炎症模型,通过CCK8法检测菊苣酸的细胞毒性并确定有效剂量;以ROS指示剂DCFH-DA染色为主线,结合全波长荧光酶标仪、荧光显微镜以及流式细胞术,并辅以DHE染色进行荧光显微镜观察评价菊苣酸抑制氧化应激的能力。该课程涵盖多学科实验技术,将基础实验与创新实验有机融合,在巩固基础知识的同时深化理解重点实验技术相关知识。为学生提供了一定的创新空间。

摘要：依托骨骼肌收缩实验,以“骨骼肌相关疾病”为出发点,引入2型糖尿病小鼠模型。通过对2型糖尿病小鼠的尿糖、口服糖耐量、小腿骨骼肌收缩特性及骨骼肌病理性变化检测,并在课程中适时引入糖尿病相关的临床医学问题讨论,实现了“基础探索-教研结合-思政融合”的递进式培养模式。实验结果和教学效果问卷调查结果显示,该教学模式激发了学生的科研创新兴趣,开阔了学生的学术视野,提升了学生综合实验能力,培养了发现-分析-解决-总结问题的能力,在丰富教学资源和形式的同时也提高了生理学实验的教学质量。

摘要：随着科学技术的发展,国家对创新型科研型人才的需求急剧升高,培养科研型医学生的必要性不言而喻。探索新的医学教学方法,提升医学生的科研能力,培养有科研思维的高素质医学人才迫在眉睫。医学教育需要学习许多门课程,形态学整合实验课程,是医学生的重要实验课程,也是其接触科研的关键课程。为了在满足课程的教学目的的同时,培养医学生的科研思维,提高医学生的科研能力,为走向临床打下坚实的基础。江南大学无锡医学院打破传统的形态学实验课程教学,在教学基础实验技术的同时,融入科研设计性实验,将科学研究和形态学整合课程进行有效融合。江南大学无锡医学院依托江南大学大型仪器共享平台,设计打造“教研共同体”特色形态学整合课程。以探索疾病发生发展为导向,让学生参与科研实验探索过程。结果发现,在形态学整合实验教学的同时,激发了学生的探索兴趣,提高了学生的实验动手能力和科研创新能力。学生学习反馈积极,课程改革取得了较好的成效。

摘要：本研究的主要目的是探讨适宜浓度短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)混合物对炎症环境下小胶质细胞的抑炎作用及其机制.采用脂多糖(LPS)刺激小鼠小胶质细胞系BV-2细胞建立神经炎症模型,并利用CCK8试剂盒检测不同浓度单一的乙酸钠、丙酸钠、丁酸钠处理后的细胞活力.设计选取这三种SCFAs对细胞活力无影响、且有抑炎效果的特定浓度进行组合(SCFAs mix),进一步检测SCFAs mix对LPS刺激下BV-2细胞炎症反应的影响及机制,包括:a.用一氧化氮(NO)试剂盒检测NO的释放;b.用ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-6的释放;c.用qRT-PCR和Western blot检测炎症因子TNF-α、IL-6、炎症小体NLRP3、炎症通路相关蛋白TLR4、NF-κB等的表达变化.结果表明LPS刺激BV-2细胞4 h后,在体系中添加特定浓度的单一SCFA处理12 h后,不能缓解BV-2细胞的炎症反应,而将上述SCFAs配制成同等终浓度的SCFAs mix处理12 h却能显著降低细胞培养上清液中NO、TNF-α和IL-6 (均P<0.001)的量,还能抑制BV-2细胞内iNOS、TNF-α、IL-6和NLRP3 mRNA的升高(均P<0.001);通过对炎症信号通路关键分子的检测发现,SCFAs mix可以抑制LPS诱导的BV-2细胞内TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB蛋白的表达升高.综上可见:适宜浓度的混合SCFAs可通过调控TLR4/MyD88/TRAF6/NF-κB炎症通路抑制LPS诱导的小胶质细胞的炎症反应,而起到抗炎的保护作用.

摘要：从生理、心理和环境3个方面总结了病人在康复锻炼过程中的需求特征。以拉伸锻炼器作为设计目标,归纳出产品设计的适应性、互动性、易用性、情感化和智能化原则,并分析其产品功能实现的关键技术。提出智能化拉伸锻炼器的设计方案,并从功能设计、造型设计和交互设计3个方面阐述了设计方案,为相关产品的设计提供参考。

摘要：环氧化物水解酶可催化外消旋环氧化物的动力学拆分或对映归一性水解制备手性环氧化物或邻二醇,具有广阔的应用前景。为提高宇佐美曲霉环氧化物水解酶(Au EH2)催化外消旋对甲基苯基缩水甘油醚(rac-pMPGE)的对映体选择率(E)。通过分子动力学模拟(MD)选取相互作用频率最高的位点A250替换为其他19种氨基酸;选取对映选择性显著提高的突变体测定其动力学参数(Km和kcat)及区域选择性系数(βS和βR),并利用重组大肠杆菌全细胞拆分racp MPGE。突变体AuEH2A250H的E值从12.7提高至38.4,重组菌比活力为51.9U/g湿细胞;其水解(S)-pMPGE的kcat/Km从10.0mmol/(L·s)提高至12.8 mmol/(L·s),而水解(R)-pMPGE的kcat/Km从1.13mmol/(L·s)降低至0.35mmol/(L·s);全细胞拆分20mmol/L rac-p MPGE获得(R)-pMPGE的ees为>99%,产率从33.0%提高至40.7%。A250位点的突变对Au EH2的对映选择性和酶活力具有显著影响;高对映选择性的Au EH2突变体在制备高光学纯的(R)-pMPGE中具有应用潜力。

摘要：利用基因工程技术改造酶分子已成为现代分子酶工程的一个研究热点,其中基于融合蛋白设计的融合酶技术已逐渐应用于多功能酶的构建中,表现出了重要的理论与应用研究价值。作为重组融合蛋白不可缺少的部分,连接肽已在融合蛋白的稳定性、生物活性等方面表现出重要的作用。根据近年来的最新研究成果,作者总结了自然界中天然连接肽的性质,并对糖苷水解酶融合酶中连接肽的分类及其对融合酶的作用作了归纳和总结,并对连接肽设计的关键问题进行了探讨和展望。

摘要：为提高米曲霉(Aspergillus oryzae)糖苷水解酶家族(GHF)11木聚糖酶AoXyn11A的耐热性,将其N-端置换为来源于嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的同一家族耐热木聚糖酶pXYL11的对应区域。基于木聚糖酶耐热性的理性设计,采用大引物PCR技术将AoXyn11A基因(Aoxyn11A)的5′-端DNA片段置换为pXYL11人工合成基因(xyn11PM)的对应片段,构建出杂合木聚糖酶ATX11A基因(ATx11A)。分别将Aoxyn11A和ATx11A在毕赤酵母GS115中进行了表达,并分析了重组表达产物AoXyn11A和ATX11A的温度特性。结果表明:ATX11A的最适温度T_(opt)由AoXyn11A的50℃提升至65℃,在60℃的半衰期t_(1/2)^(60)为55 min,较AoXyn11A延长了41.3倍;ATX11A在55℃处理3 h保留60%以上的酶活性,而AoXyn11A处理15 min酶活性完全丧失。本研究通过N-端置换显著改善了AoXyn11A的温度特性。

摘要：以宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78的5家族β-甘露聚糖酶(AuMan5A)为研究对象,对其底物亲和力的定向改造进行理性设计及定点突变以获取米氏常数Km值较低的突变酶AuMan5AY111F.首先采用同源建模和分子对接模拟等方法预测AuMan5A与甘露二糖对接复合物的空间结构;在此结构上使用PyMol软件统计到距甘露二糖8以内的38个氨基酸位点.其次对不同来源的、与AuMan5A一级结构序列全同率大于50%的β-甘露聚糖酶进行多序列比对;排除21个保守氨基酸位点,依据17个非保守位点上的氨基酸性质及其所处空间位置,选择AuMan5A中的Tyr111、Phe206和Tyr243作为拟突变氨基酸,将它们分别替换为性质相似的或在其他β-甘露聚糖酶序列中出现频率高的氨基酸,形成一系列拟突变酶.最后采用MM-PBSA法计算AuMan5A及其拟突变酶与甘露二糖的结合自由能(ΔGbind),其中AuMan5AY111F的ΔGbind为-237.7kJ/mol,较其他酶的ΔGbind均低.基于该理性设计采用大引物PCR技术将AuMan5A基因(Auman5A)中编码Tyr111的密码子TAC突变为编码Phe111的TTC,构建出突变酶基因(Auman5AY111F).分别将Auman5AY111F和Auman5A在毕赤酵母GS115中进行表达,并对重组表达产物reAuMan5AY111F和reAuMan5A进行分离纯化和动力学常数测定.结果表明:reAuMan5AY111F对瓜尔豆胶的Km值由突变前的3.9mg/mL降低为2.5mg/mL;而突变前后酶的Vmax值变化不大.该研究运用多种生物信息学软件对提高AuMan5A底物亲和力进行了理性设计,并通过定点突变证实之,这为β-甘露聚糖酶乃至其他各种酶底物亲和力的定向改造提供了新的技术策略.

摘要：以问题为基础的学习(problem based learning,PBL)模式,体现以学生为主体,具有综合性、灵活性以及学习内容的拓展性.目前许多医学院校的基础医学学科都应用了PBL教学法[1-3].组织学与胚胎学作为基础课程开设的时间较早,学生在接受知识的过程中培养什么样的思维模式和行为习惯,对后续课程的学习有着至关重要的影响.为克服组织学与胚胎学中实施PBL教学存在的问题[1-3],设计了对PBL学习的指导性教学系统,实现基于网络的资源配备型PBL学习法,从而达到培养学生自主学习和终身学习的能力,实现为后续课程的学习打好基础的教学目标.