摘要：伤寒沙门菌是一种具有鞭毛的革兰阴性人类肠道致病菌,也是一种重要的原核生物研究用模式菌.基因组芯片能够系统、全面且高效地观察生物的基因表达及进行基因组结构比较.利用伤寒沙门菌现有的全基因组序列,以Ty2菌株的基因组为基准,选取CT18菌株和z66阳性菌株的特异性蛋白编码基因,设计特异性引物,经PCR有效扩增出4201个基因,产物纯化后点样于多聚赖氨酸玻片制备伤寒沙门菌基因组DNA芯片,并验证了芯片样点位次与效果.通过对基因表达谱分析的各种条件进行优化,建立相应的表达谱分析方法,并用于比较伤寒沙门菌野生株在高渗、低渗条件下的基因表达差异,结果与以前的报道基本一致.结果表明,成功建立了伤寒沙门菌基因组DNA芯片及表达谱分析方法,可为有关伤寒沙门菌基因表达调控及致病性机理、进化和基因多样性等方面的深入研究提供有效的技术支持.

摘要：目的:总结以间质干细胞为载体细胞的基因治疗的进展,为细胞基因修饰在实验性基因治疗中的应用提供提示。资料来源:用计算机检索Medline,Pubmed和Springer数据库1998-01/2005-12与骨髓间质干细胞基因治疗相关的文章,检索词为“mesenchymalstemcells,genetherapy”,并限定文章语言种类为English。同时计算机搜索CNKI中国全文期刊数据库1998-01/2005-12与骨髓间质干细胞基因治疗相关的文章,限定文章语言种类为中文,检索词为“间质干细胞,基因治疗”。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①选择与间质干细胞,转基因,基因治疗、运输、转导有关文章。②在1998年以后发表的文章。排除标准:重复文章、综述文献、Meta分析类文章。资料提炼:共搜集到273篇相关文章,入选41篇。对检索到的文章的相关信息综合加以概括综述,其中间质干细胞的生物学特性、自我更新和分化10篇,以间质干细胞作为靶细胞的基因治疗31篇。资料综合:细胞介导的基因治疗,包括诱导转移性基因进入细胞的病毒和非病毒载体的设计,转移性基因的能力,引导修饰性基因或者被分泌的治疗性物质进入疾病组织的能力以及在干细胞内的治疗性物质产物的最佳化和调节等。运载缺失的基因可以促进心脏的功能性恢复,心肌的再生则可以用来修复心肌损伤。骨髓来源的间质干细胞对治疗自身免疫性疾病的免疫抑制效应非常重要。结论:间质干细胞是具有潜在应用前景的基因治疗的载体细胞。间质干细胞来源丰富,易于在体外分离和培养,并具有自我更新和多系分化的能力,通过体内外分泌一系列的蛋白从而对遗传缺陷性疾病或获得性疾病进行治疗。

摘要：目的运用聚合酶链反应技术从巨大芽孢杆菌中获得葡萄糖脱氢酶基因,并表达该基因。方法根据巨大芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因两端序列设计引物,通过PCR获得该基因,与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行诱导表达。结果重组基因表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定显示特异性条带,并且酶活力达15u/mL,比活力为10u/mg。结论运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因,经诱导获得了较高产量的葡萄糖脱氢酶。

摘要：背景：组织工程支架材料表面的微观和亚微观结构对细胞的黏附与生长有很重要的影响。利用纳米技术和三维造孔技术制备的纳米晶羟基磷灰石，胶原骨模仿了天然骨的成分与微结构特征。目的：观察体外培养的人骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石，胶原骨的细胞相容性。设计、时间及地点：单一样本观察，于2005-09／2006—12在江苏大学医学技术学院完成。材料；纳米晶羟基磷灰石，胶原骨由清华大学材料科学与工程系研制。人骨髓间充质干细胞由健康成年志愿者自愿捐献，受试者对实验内容知情同意。方法：全骨髓法体外培养骨髓间充质干细胞，应用成骨诱导剂（地塞米松、维生素C、β-磷酸甘油、碱性成纤维细胞生长因子）诱导向成骨细胞表型转化。将第3代骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石，胶原骨复合培养14d。主要观察指标：通过碱性磷酸酶组织化学染色、Von Kossa染色鉴定诱导培养的成骨细胞的细胞学特性。通过倒置显微镜、扫描电镜观察细胞生长及其在纳米晶羟基磷灰石，胶原骨上的生长情况。结果：原代培养的骨髓细胞增殖迅速，10～12d左右即可稳定传代，传代细胞7-9d即可传代。经诱导培养的细胞碱性磷酸酶组织化学染色阳性，Von Kossa染色阳性，可见钙化的基质沉积，呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征。构建的骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石／胶原骨共培养模型中，细胞可在纳米晶羟基磷灰石，胶原骨表面良好贴壁。复合培养8d，分布于支架材料上的细胞大量增殖、分泌细胞外基质。复合培养14d，大量细胞在材料表面和孔隙中生长，细胞之间广泛存在突起连接。结论：纳米晶羟基磷灰石肢原骨适合种子细胞的贴附、生长和增殖，细胞相容性良好。

摘要：目的探讨幽门螺杆菌超声裂解液对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响,以及Bcl-xl基因在胃癌BGC-823细胞增殖中所起的作用。方法分别用东亚型和西方型幽门螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24h,MTT法检测细胞增殖情况,荧光定量PCR法检测胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达情况。设计特异的Bcl-xl shRNA阻断Bcl-xl基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖。结果螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24h后,与对照组相比,处理组BGC-823细胞出现增殖(P<0.01),BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达也出现上调;并且东亚型螺杆菌超声裂解液处理组的促增殖作用强于西方型处理组(P<0.01),东亚型螺杆菌超声裂解液处理组细胞中Bcl-xl基因mRNA的表达水平也高于西方型处理组(P<0.01)。Bcl-xl shRNA可以下调Bcl-xl基因mRNA及蛋白水平的表达,同时抑制胃癌BGC-823细胞的增殖。结论 Bcl-xl基因对幽门杆菌感染相关性胃癌中癌细胞的增殖起了促进作用。

摘要：目的对人幽门螺杆菌（***）编码47kDa外膜微孔蛋白基因omp47克隆表达及特性鉴定，探索研制***疫苗的新途径。方法培养和收集***标准菌株NTTCll637及临床菌株，采用酚：氯仿抽提、纯化基因组DNA。设计上下游引物，并以该基因组为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增omp47基因片断。将目的基因和与克隆载体PGEM-T连接后，转化至EcoliDH5a及BL21，碱裂解提取质粒经BamHl和Xhol双酶切鉴定并进行序列分析。重组蛋白采用IPTG诱导表达后，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）鉴定、镍亲和层析纯化检测抗原活性。结果经酶切、测序分析表明，插入的基因片断为1284bp，编码427个氨基酸。与GenBank公布的***标准株26695、43504及J99序列比对，核苷酸同源性高达94%～96％，编码氨基酸同源性96%～99%。经SDS-PAGE检测，电泳图谱上显示一条相对分子量为47kda的新生蛋白带。Westernblot检测表明重组蛋白有较好的抗原性。结论成功克隆了外膜微孔蛋白OMP47的编码基因，为***疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。

摘要：目的:构建幽门螺杆菌(***)Cag致病岛编码hp0527基因的突变株。为Cag致病岛致病机制及***功能研究奠定基础。方法:利用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(KanR)连接到PCR扩增hp0527两端区域产生的2个目的基因片段之间,构建hp0527基因缺失的自杀质粒pBlueKM40-Δhp0527;将带有卡那霉素抗性标志的缺失突变载体,通过抗生素卡那霉素筛选出缺失hp0527基因的突变株,并经PCR方法鉴定后,采用野生株和突变株的幽门螺杆菌分别与胃癌上皮细胞BGC-823共培养后,分析它们对细胞毒素相关蛋白CagA转运能力的影响。结果:成功构建出幽门螺杆菌hp0527基因突变的自杀质粒,突变载体经内切酶酶切分析显示:产生的条带与设计结果完全一致;抗生素筛选并经PCR鉴定后,获得了hp0527基因缺失株;CagA蛋白转运分析表明基因hp0527缺失前后,可以导致细菌转运CagA蛋白能力的丧失。结论:成功构建出1株缺失hp0527基因的***突变株,对于阐明该基因的功能及其在***致病中的地位及作用具有重要的研究价值。

摘要：背景：来氟米特是一种新型的免疫抑制剂，其活性产物A771726在体外能抑制增生分裂细胞的二氢乳清酸脱氢酶和酩氨酸激酶的活性，抑制活化淋巴细胞的增殖。目的：观察骨髓间充质干细胞在体外联合来氟米特对小鼠淋巴细胞增殖的抑制效应。设计、时间及地点：随机对照，细胞学免疫调控实验，于2007—06／11在江苏大学附属医院中心实验室完成。材料：清洁级5-6周龄BALB／c雌性小鼠42只，18只分离制备骨髓间充质干细胞，传至第3代用于实验；24只用于制备脾淋巴细胞。来氟米特活性代谢产物A771726由美国欣凯公司肖飞博士惠赠。非特异性有丝分裂原ConA、脂多糖为sigma公司产品。方法：将制备的T、B淋巴细胞悬液分为骨髓间充质干细胞组、来氟米特组、骨髓间充质干细胞＋来氟米特组，其中骨髓间充质干细胞浓度为2×10^8L^-1，骨髓间充质干细胞数：淋巴细胞数=1：30，来氟米特终浓度为15mg／L，此外各组加入5mg／L非特异性有丝分裂原ConA或25mg／L脂多糖。主要观察指标：MTF法检测T、B淋巴细胞增殖抑制率。通过表面标志检测T、B淋巴细胞活化情况。流式细胞仪测定T淋巴细胞凋亡程度。RT-PCR法检测T淋巴细胞干扰素γ、白细胞介素10、白细胞介素4mRNA表达水平。结果：与阳性对照比较，骨髓间充质干细胞组、来氟米特组、骨髓间充质干细胞＋来氟米特组T淋巴细胞体外增殖抑制率均明显提高（P〈0．05），且后者变化幅度大于前两组（P〈0．05）；各组B淋巴细胞增殖抑制情况与上述结果相似。与阳性对照比较，各组T淋巴细胞CD3^＋CD69^＋、CD3^＋CD28^＋的表达以及B淋巴细胞CD19^＋CD69^＋、CD19^＋CD86^＋的表达均基本相似；骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞＋来氟米特组T淋巴细胞凋亡率明显下降（P〈0．05）。与阳性对照比较，骨髓间充质干细胞＋来氟米特组可使T淋巴细胞干扰素γmRNA提高、白细胞介素10mRNA降低（P〈0．05），白细胞介素4mRNA表达无变化，且其前2项指标变化幅度明显大于骨髓间充质干细胞组、来氟米特组（P〈0．05）。结论：骨髓间充质干细胞与来氟米特体外联合，能抑制T淋巴细胞凋亡，可协同抑制T、B淋巴细胞增殖、白细胞介素10mRNA表达，协同促进干扰素γmRNA的表达，对T、B淋巴细胞活化、白细胞介素4mRNA表达无影响。

摘要：目的:构建荧光实时定量RT-PCR测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因mRNA的方法。方法:根据伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因序列,设计引物扩增其读码框架内片段,克隆进pGEM-TEasy质粒。质粒经PCR鉴定后,纯化并定量,作为荧光实时定量PCR的标准品,并制作标准曲线。利用不同渗透压下的鞭毛素基因表达差异,比较三种随机引物(6、8、10核苷酸)与特异性引物的逆转录效果,以确定一种最佳的随机引物用于多基因表达观察。结果:标准曲线有较好的线性(r=0.999),cDNA和标准品的PCR产物溶解曲线峰值一致。用8核苷酸随机引物进行逆转录的敏感度高于6、10核苷酸随机引物,低于特异性引物,但用其观测z66抗原基因和d/j抗原基因在高、低渗时表达变化趋势与用特异性引物测得结果一致。结论:成功构建用8核苷酸随机引物进行逆转录同时测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j基因表达的荧光实时定量RT-PCR方法。

摘要：目的:为探讨z66鞭毛抗原阳性伤寒沙门菌的fljA样基因的功能,制备沙门菌fljA样基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌fljA样基因序列,设计PCR特异性引物并在5'末端加接酶BglII位点,扩增fljA样基因上、下游片段,用BglII消化后,定向连接成fljA样基因的缺损性同源性核苷酸片段,先克隆至pGEM T质粒,再经BamHI酶切后导入自杀质粒pGMB151,电转化入伤寒沙门菌(GIFU10007),进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为fljA样基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的fljA样基因缺失231个碱基。结论:成功构建伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌鞭毛抗原表达的调控作用奠定了基础。