摘要：目的:建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化。方法:设计针对DAPK基因启动子的MSP引物,建立MSP检测体系对甲基化阳性模板进行检测,评价其特异性、重复性和灵敏性,并经测序鉴定。结果:所建立的甲基化MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板,不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;对不同梯度稀释的甲基化阳性模板进行检测,其最大敏感性可达2%;在不同时间进行甲基化MSP检测的结果均一致。结论:成功建立的DAPK基因启动子甲基化MSP检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,可用于肿瘤标本的批量检测。

摘要：目的 探讨RNA干扰（RNA interference,RNAi）沉默TDGF-1基因表达对乳腺癌细胞侵袭的影响.方法 根据TDGF-1基因序列特点设计3个小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）后,转染人乳腺癌MDA-MB-468细胞,用荧光实时定量RT-PCR筛选出效果最好的siRNA.以该siRNA转染处理乳腺癌MDA-MB-468细胞后,分别采用实时定量RT-PCR和western blot检测TDGF-1基因mRNA和蛋白水平,以划痕试验方法评测癌细胞迁移能力;用Boyden模型观察癌细胞侵袭能力.结果 根据TDGF-1基因序列特点设计的3个siRNA均能抑制TDGF-1基因mRNA水平,以S1效果最好.S1 siRNA转染组TDGF-1 mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.001,P＜0.001）.体外试验发现,TDGF-1 siRNA转染可有效抑制乳腺癌细胞集落生长、侵袭和迁移能力,且与浓度相关（P＜0.005,P＜0.005,P＜0.005）.结论 TDGF-1在乳腺癌细胞迁移、侵袭中起着重要的作用;采用TDGF-1 siRNA转染可抑制乳腺癌细胞侵袭.

摘要：目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础。方法:根据基因库公布的人OX40和hIgG1 Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中。随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体。再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出最佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40Ig基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量。结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确。重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞。得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为最佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达。结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白。

摘要：目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对大肠癌肝转移的影响。方法:根据VEGF基因mRNA设计合成小干扰RNA,采用荧光实时定量PCR检测VEGF mRNA水平,分别以软琼脂集落培养试验和Boyden模型观察癌细胞锚着不依赖性增殖和癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立大肠癌肝转移模型,以不同方法处理的癌细胞接种模型,观察对大肠癌细胞肝转移的影响。结果:转染组VEGF基因mRNA水平明显降低,且呈浓度和时间依赖性。经VEGF siRNA转染处理的癌细胞软琼脂集落形成数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性(P<0.05,P<0.05)。体内试验发现,对照组10只全部出现大肠癌肝转移灶,而siRNA组仅仅1只出现肝转移,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:VEGF基因在大肠癌肝转移中起着重要的作用;以RNAi技术沉默VEGF基因表达,可抑制大肠癌细胞肝转移。

摘要：目的:研究RASSF1基因在各种肿瘤细胞中的表达情况以及分析RASSF1各成员与肿瘤发生的相关性。方法:设计特异性的引物,用RT-PCR方法检测5种肿瘤细胞中RASSF1家族7种不同转录本mRNA的表达情况。结果:同源序列分析表明,转录本A、D、E序列最长,同源性较高,推测是起主要功能的一类基因,而B、C、F和G等缺失部分较大,可能是细胞突变引起;转录本A、D和E在各种肿瘤细胞中均未见表达,而其他转录本B、C和F在肿瘤细胞中有转录。结论:RASSF1基因7种转录本在被测试的5种肿瘤细胞中的表达存在明显差异,转录本RASSF1的A、D和E等在几种肿瘤细胞中均未表达,说明这几个转录本可能作为抑癌的候选基因。

摘要：目的考察和分析镇江地区居民对生前预嘱的认知情况,为生前预嘱这个重要的人生课题提供人口学资料。方法 2017年1月至3月在镇江地区对>18岁的常住人口进行纸质问卷调查,合计调查1050例。共发放自行设计的纸质问卷1050份,剔除拒绝调查及调查内容不完整者,回收1000份有效问卷,有效回收率95.24%(1000/1050)。调查表的内容包括性别、年龄、受教育程度、健康自评、家庭人员月均生活费、婚姻状况、是否有子女、医疗付费方式、职业和是否目睹过患者临终前状况。对生前预嘱的认知程度分为完全不了解、基本不了解、有些了解、基本了解、完全了解5个类别。结果性别、年龄、受教育程度、健康自评、家庭人员月均生活费、婚姻状况、医疗付费方式、职业和目睹过患者临终前状况等均可影响居民对生前预嘱的认知情况(P0.05),594例对生前预嘱的认知为"完全不了解"至"基本不了解",235例为"基本了解"和"非常了解"。对生前预嘱认知不同的人群了解生前预嘱的途径相似(P>0.05),大多数从网络或电视媒体途径获得,但对于自己接受"我的五个愿望"的生前预嘱不同及推荐周围人使用生前预嘱的意愿不同,随着了解程度的加深,自己的接受度及愿意推荐其他人使用的意愿度增高(P<0.05)。结论居民对生前预嘱的认知程度较低,大部分人处于完全不了解或基本不了解状态。生前预嘱的认知程度受到多种因素影响,其中受教育程度较低、家庭人员月均生活费较低和职业不同对生前预嘱认知程度影响较大。

摘要：目的 探讨中国汉族人群中白介素33（IL-33，interleukin-33）基因单核苷酸多态性（SNP,single nucleotide polymorphism）与脓毒症发生风险及疾病严重程度的相关性。方法 采用病例-对照研究设计，标签SNP（tagging SNP，tagSNP）策略，应用Sequenom MassARRAY？SNP检测技术完成对IL-33基因的标签SNPs分型。采用非条件Logistic 回归分析，并对性别、年龄、吸烟和饮酒、APACHEⅡ评分、慢性病状态等混杂因素进行校正后，评估IL-33单核苷酸多态性与脓毒症易感性的关系，以及脓毒症继发的严重脓毒症、脓毒症休克、死亡等表型的相关性。 结果 在所选的7个IL-33标签SNPs（rs10118795 C/T，rs16924159 G/A，rs1891385 A/C，rs2210463 A/G，rs72614079 A/G，rs76864631 G/A，rs7849201 C/T）中，rs76864631不符合Hardy-Weinberg平衡定律，其余6个多态位点及单体型与脓毒症的发生风险和疾病的严重程度均无明显相关性。 结论 IL-33基因多态性可能与中国汉族人群脓毒症的发生、发展和病程转归无关。

摘要：目的构建保罗样激酶-1（PLK1）基因小干扰RNA（siRNA），并观察其对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成5个PLK1siRNA（S1、S2、S3、S4、S5），转染人甲状腺癌ARO细胞后，采用实时定量RT—PCR方法筛选下凋PLK1mRNA效果最好的siRNA；然后以该siRNA转染ARO细胞后，分别以实时定量RT—PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因表达情况；以MTT法检测对各组细胞增殖的影响；分别以caspase-3活性和TUNEL方法明确甲状腺癌细胞凋亡情况。结果5个siRNA均明显下调PLK1mRNA水平，以S4效果最好，抑制率达91．5％。MTT结果显示，S4siRNA转染对甲状腺癌细胞增殖均有明显的抑制作用，且呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）。与对照组比较，S4siRNA转染组癌细胞caspase-3活性明显升高，且呈浓度和时间依赖性（r=0．919；r=0．957）；TUNEL结果显示，S4 siRNA转染组出现明显的凋亡现象，且呈浓度依赖性（r=0．932）。结论PLK1基因在甲状腺未分化癌细胞增殖中具有重要的调控作用。PLK1 siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖，诱导凋亡是其重要机制之一。