摘要：急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease, AHPND)是一种新型对虾病害,其病原为一类携带编码二元毒素蛋白PirAB的弧菌(VPAHPND),可感染对虾且致死率高。本研究利用GenBank公布的pirAB全基因序列设计特异性引物,通过PCR获得目的基因pirA、pirB、pirAB并克隆至表达载体pET 21b(+)中,构建BL21-pET21b-pirA、BL21-pET21b-pirB、BL21-pET21b-pirAB原核表达体系;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化,分析重组蛋白的最佳表达条件;采用Ni磁珠对重组蛋白进行纯化,并以Western-blot方法分析其抗原性。结果表明,PirA、PirB、PirAB的重组蛋白分子质量分别约为17 kDa、50 kDa和(50+17) kDa,与预期大小一致。重组蛋白的最佳诱导条件:IPTG浓度0.01 mmol/L,PirA和PirAB 30℃诱导24 h、PirB 30℃诱导4 h,蛋白均呈现可溶性表达;纯化后的重组蛋白具有较好的反应原性,可为下一步的抗体制备和AHPND致病机理研究提供充足的实验材料。

摘要：研究用 ＲＡＰＤ技术对条斑紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａ　ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ）、坛紫菜（Ｐ． Ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ）。半叶紫菜（Ｐ．Ｋａｔａｄａｉ ｖａｒ． Ｈｅｍｉｐｈｙｌｌａ）和少精紫菜（Ｐ．Ｏｌｉｇｏｓｐｅｒｍａｔａｎｇｉａ）的１５个无性系丝状体进行了遗传多样分析，用１２０个Ｏｐｅｒｏｎ引物进行了筛选，从中选用来自ＯＰＪ－１８和ＯＰＮ—０２扩增出的８条多态性条带构建了这１５个紫菜无性系的ＤＮＡ指纹图谱，在该图谱中每个紫菜无性系均有各自特异的ＤＮＡ指纹．用１和０分别表示ＤＮＡ带的出现和缺失，将各个无性系的ＤＮＡ指纹用计算机语言表示，建立了１５个紫菜无性系的计算机化ＤＮＡ指纹；在此基础上设计了紫菜无性系种质鉴定的计算机软件ＰｈＧＩ．