摘要：为在毕赤酵母中表达人溶菌酶基因,根据已发表的人溶菌酶基因序列设计引物,扩增人溶菌酶全基因片段,将其克隆进巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-LYZ,经Sac I酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导表达。SDS-PAGE证实表达的重组蛋白质分子量正确,抑菌试验结果表明重组hLYZ对微球菌具有良好的抑菌效果。说明人溶菌酶基因在毕赤酵母中成功表达。

摘要：为制备禽腺联病毒Rep蛋白多抗血清,根据已发表的禽腺联病毒基因组序列设计2对引物,扩增出Rep78、Rep52基因,分别将其克隆入原核表达载体pET-30a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下,2种蛋白均获得了高效表达,SDS-PAGE显示2种重组蛋白分子量均正确。将重组蛋白切胶免疫ICR小鼠,分别制备了针对2种蛋白的多抗血清,Western blot实验显示制备的抗血清能够与Rep78和Rep52抗原发生特异反应。以上结果说明,Rep78和Rep52蛋白在大肠杆菌中获得成功表达,且制备的多抗血清可用于Rep基因的表达检测。

摘要：根据已发表的牛气管抗菌肽(bTAP)序列和酵母密码子偏爱性设计并合成一段bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母pPIC9K质粒连接后构建了分泌表达载体pPIC9K-bTAP。获得重组质粒经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选获得了阳性转化重组菌。通过对重组菌培养条件的进一步优化,揭示了重组蛋白bTAP可在含2%酸水解酪蛋白的BMMY培养基中经0.5%甲醇在28℃诱导表达72h后获得最优表达。抑菌试验表明bTAP对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。

摘要：为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。

摘要：为筛选出能有效抑制传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因复制的miRNA,采用RT-PCR方法从病毒基因组中进行结构蛋白VP2的基因扩增与序列测定,构建融合表达载体pVP2-EGFP。根据VP2测序结果,借助genscript软件设计针对VP2的5条miRNA,分别命名为miVP2A、miVP2B、miVP2C、miVP2D和miVP2E,将合成的5条miRNAs分别插入到pRFPRNAiC中形成miVP2s表达载体,这些载体分别与pVP2-EGFP共转染DF-1细胞系,通过NortheringBlotting方法检测miVP2s的表达,利用荧光共聚焦显微镜定性、流式细胞术定量的方法进行有效miVP2s的筛选。结果显示:miVP2s能成功表达;转染miVP2s表达载体组的绿色荧光蛋白(GFP)强度和数量都明显弱于或少于阴性对照组;miVP2s对VP2的抑制效率为59.7%到78.5%。表明所设计的miRNAs对VP2均有抑制作用,其中miVP2A和miVP2E效果最为显著。

摘要：为了在毕赤酵母中获得牛气管抗菌肽(bTAP)的表达,根据已发表的牛气管抗菌肽序列和毕赤酵母对密码子的偏爱性设计2对引物,采用重叠延伸PCR法获得bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母(Pichia pastoris)pPIC9K质粒连接,构建表达载体pPIC9K-bTAP。用SalⅠ酶切线性化pPIC9K-bTAP质粒后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导其表达。SDS-PAGE分析结果表明表达的重组蛋白质分子量正确,抑菌试验结果表明表达的重组蛋白质bTAP对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。