摘要：本研究通过对猪细小病毒(PPV)1型非结构蛋白NS1基因保守序列进行设计,建立了PPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,实现了对PPV1的快速检测。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品质粒在1.0×10^(10)copies/μL~1.0×10^(4)copies/μL范围内具有良好的线性关系,曲线回归方程为y=-3.6186x+42.01,R^(2)=0.99,扩增效率为189%;重复性好,组内与组间变异系数均低于1.0898%;敏感性好,最低检测限为1.0×10^(1)copies/μL;特异性强,不与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、非洲猪瘟病毒发生交叉反应,并用该方法对临床样品与病毒拷贝数进行了检测。表明本研究建立的方法重复性好、敏感性高、特异性强,适用于对PPV进行临床检测与诊断。

摘要：根据GenBank已登录的经典兔黏液瘤病毒(MYXV)和重组兔黏液瘤病毒(ha-MYXV)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立能同时检出ha-MYXV和MYXV病原的快速、简单且敏感性较高的TaqMan探针荧光定量PCR临床检测方法。结果显示,稀释度为1×10^(7)~1×10^(3)拷贝/μL标准品建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为1.00;该方法对MYXV和ha-MYXV具有高度特异性,与绿脓杆菌、兔多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、兔出血症病毒1型、兔出血症病毒2型等其他病原间无交叉反应;检测灵敏度可达1×10^(2)拷贝/μL;组内和组间变异系数在0.05%~1.19%间。该方法的建立为引进种兔及家兔相关产品兔黏液瘤病毒的检疫提供了技术支撑。

摘要：旨在建立犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。针对CCoV的3′UTR与CPV的VP2设计引物与探针,通过对反应体系与条件进行优化,建立了CCoV与CPV的双重荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性、重复性验证与临床样品检验。结果:CCoV与CPV阳性参考质粒浓度在10^(2)~10^(7) copies/μL,CCoV与CPV的标准曲线R^(2)分别为0.999与0.996,线性关系良好,CCoV与CPV的最低检测限均为5 copies/μL,与其他病原无交叉反应,组内与组间的变异系数均小于1.38%,说明该方法灵敏度高、特异性强、重复性良好;对113份临床样本进行检测,与普通PCR比较,该方法对CCoV和CPV的检出率较高,分别为37.2%和40.7%。研究表明,本试验建立的CCoV和CPV双重荧光定量PCR方法检测效果良好,为相关疾病的临床诊断、流行病调查等提供了有力工具。

摘要：为深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的编码基因B602L,本研究根据ASFVSY18株的B602L基因序列(MH766894.3),设计引物合成1593 bp的B602L基因全长序列,构建pCold-TFB602L原核表达质粒。将鉴定正确的原核表达质粒转化感受态细胞,用IPTG诱导表达重组蛋白B602L并通过SDS-PAGE进行验证和分析。用纯化后的pB602L蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,测定抗体效价并经Westernblot鉴定其特异性。同时基于本实验室前期研究,构建表达B602L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)全长感染性克隆。本研究将ASFV B602L基因全长序列插入PRRSVORF1b和ORF2a之间,转染全长感染性克隆质粒后拯救获得重组病毒rPRRSV-B602L,并对其进行病毒学特性分析。利用制备的多克隆抗体与重组病毒和真核细胞表达的蛋白进行Western-blot和IFA验证。结果显示,成功构建pCold-TF-B602L原核表达质粒,诱导表达的重组蛋白pB602L可与His标签单抗和制备的抗pB602L抗体产生特异性反应,其效价为1∶16000;成功构建并拯救出重组病毒rPRRSV-B602L,它与亲本病毒具有相似的病毒学特性。本研究拯救的重组病毒可以稳定表达pB602L蛋白,该抗pB602L多克隆抗体能够特异性识别重组病毒表达的蛋白和真核细胞表达的蛋白,具有良好的特异性和反应原性,为进一步探索pB602L蛋白的功能及研制表达ASFV特异性抗原蛋白的重组PRRSV活载体疫苗提供一定的研究基础。

摘要：以实际基因频率为基础，用计算机模拟和实例分析等方法研究了Ｎｅｉ氏标准遗传距离估测精度的影响因素。指出：（１）稀有等位基因和在品种间低变异度的基因对聚类分析贡献极小，实验设计中可不予考虑；（２）相似品种间具有较低的遗传距离期望值，此时遗传距离的估测精度较低，实验设计中应多考虑位点数和个体数；（３）位点数较少时遗传距离估测精度较低，可靠性不高，使用很少位点进行聚类分析的工作以后不应再度进行；（４）随个体数增加，遗传距离估测精度增高。

摘要：应用逆转录多聚酶链反应技术，参照 Ｂｏｕｒｓｎｅｌｌ等发表的鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列，自行设计并合成１对引物，应用该引物，从感染ＩＢＶ金坛株的第五代ＳＰＦ鸡胚尿囊液中扩增出片段大小为８２８ｈｐ的ＪＴ株 Ｎ基因，与设计相符，表明扩增片段为 ＩＢＶ ＪＴ株 Ｎ基因。将扩增片段与 ｐＧＥＭ－ Ｔ Ｅａｓｙ载体连接，经核酸序列测定，与Ｇｅｎｅｂａｎｋ中报道的ＩＢＶ其它株Ｎ基因同源性较高。

摘要：构建表达Tir和Hly的融合基因,将Tir基因的C端414个氨基酸残基(Tir414)基因部分与Hly基因的C端300个氨基酸残基(Hly300)基因部分串联构建pET28a-Tir414-Hly300重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。由于该融合蛋白由Tir和Hly2部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和溶血素(Hly)的抗体,在EHECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。

摘要：饲料氨基酸消化率是评定饲料原料营养价值和可利用性的一项重要指标，也是目前动物营养领域研究的热点，饲料原料氨基酸消化率的获得为动物可消化氨基酸需要量的测定和更准确地设计日粮配方提供参考数据。

摘要：奶牛流产是奶牛的一种常见病,国内报道其发病率占妊娠奶牛的6%.妊娠的60～90 d、150～180 d为流产高峰期,这两个时段的流产率占总流产率35%以上.如何进行奶牛保胎、预防奶牛习惯性流产是提高奶牛繁殖率的一个重要措施.关于奶牛流产病因,除营养不平衡及机械性原因造成外,环境应激(如气温高、饲料发霉)、激素紊乱等均可引起孕牛流产.目前国内外防治奶牛流产的方法一般有激素疗法、中药疗法及中西结合疗法[1-2].江苏省农业科学院兽医研究所成功研制出纯中药制剂芩术保胎散.临床应用表明,服用该制剂的奶牛流产率为2.6%,未服用奶牛流产率为10%.为验证芩术保胎散是否具有安胎作用,设计并应用了大鼠流产模型,用芩术保胎散制剂进行安胎治疗对比试验,为芩术保胎散防治流产病提供药理学佐证.

摘要：从人工感染兔出血症病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus, RHDV)致死的兔肝脏组织中粗提病毒,采用SDS 蛋白酶K法提取RHDVRNA作为扩增摸板,根据Genbank已发表的RHDV的核酸序列,自行设计了 1对引物,进行RT PCR扩增,获得RHDVVP60的主要抗原域片段。经琼脂糖凝胶电泳分析其大小约为1 393bp,将扩增产物提纯后克隆至PET 32α( +)载体质粒中,经转化和进一步筛选,酶切鉴定证实获得了RHDVVP60主要抗原域基因的克隆,从而为该基因的表达和基因工程疫苗的研制奠定了基础。