摘要：旨在设计、筛选高效编辑山羊胚胎生长负调控因子SOCS2基因的sgRNA,为通过SOCS2基因编辑创制快长型山羊奠定技术基础。本研究利用在线网站对山羊SOCS2基因SH2结构域保守序列设计2条sgRNA,构建表达载体,体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA;体外检测sgRNA+Cas9蛋白切割靶DNA的效率;在此基础上将屠宰场山羊卵巢分离培养的442个孤雌胚胎进行分组,2个试验组显微注射sgRNA和Cas9 mRNA混合物,对照组注射超纯水,以单个囊胚全基因组DNA扩增产物为模板,PCR扩增靶区域并测序鉴定,发生编辑的样本进行T-A克隆测序检测编辑形式;根据在线网站预测,每条sgRNA选择5个错配数最少的潜在脱靶位点进行脱靶检测。结果表明,在SOCS2基因83和96号氨基酸密码子附近区域获得2条sgRNA并成功构建表达载体,体外转录获得高质量sgRNA和Cas 9 mRNA;两条sgRNA均可引导Cas9蛋白在体外完全切割靶DNA;SOCS2-sg-83对胚胎的编辑效率为94.1%,160个T-A克隆中有152个在靶位点出现插入、缺失或替换,概率为95.0%,其中81.3%发生了移码突变,9.4%的克隆缺失83号氨基酸密码子,累计90.6%的克隆实现了SOCS2基因功能性敲除;SOCS2-sg-96对胚胎的编辑效率为50.0%,80个T-A克隆中有70个在靶位点出现插入、缺失或替换,概率为87.5%,移码突变概率为75.0%,5.0%的克隆缺失了96号氨基酸密码子,累计80.0%的克隆实现了SOCS2基因功能性敲除。另外,在所有已编辑胚胎中均未发现脱靶。综上,SOCS2-sg-83可实现山羊胚胎SOCS2基因的高效、精准编辑和敲除,为高效制备SOCS2基因敲除山羊,培育快长型肉用山羊奠定了技术基础。

摘要：为解决群养种鹅个体产蛋信息监测难度大的问题,提出一种基于射频识别技术(radio frequency identification,RFID)与目标检测算法的种鹅个体产蛋信息监测方法。首先,使用134.2 kHz低频RFID实现无接触获取产蛋种鹅身份信息。其次,引入目标检测算法实时获取种鹅与鹅蛋的位置与数量信息,采用微调训练的方法分阶段训练目标检测模型,以增加模型在小数据集情况下的收敛速度与精度。利用种鹅定点产蛋的行为特点,将图像中每个独立产蛋区域提取为感兴趣区域,实现对每个产蛋区域的独立监测。最后,设计目标计数算法减小计数结果的误差,通过判断种鹅与鹅蛋的数量变化情况,获得种鹅个体开始产蛋时间、结束产蛋时间及产蛋结果。试验结果表明,YOLOv4目标检测模型检测种鹅与鹅蛋的平均精度均值(mAP)为93.59%,种鹅个体身份信息的监测准确率为98.5%,产蛋行为信息的监测准确率为91.3%,符合产蛋信息监测的要求。

摘要：[目的]肉鹅姿态是预警肉鹅异常行为、评判肉鹅健康状态的重要指标,针对传统养殖场人工观察肉鹅姿态耗时费力且有很大主观性等问题,提出了一种基于深度学习模型自动识别肉鹅姿态的检测算法。[方法]利用YOLO v5模型对扬州鹅4种姿态(站立、休憩、饮水和梳羽)进行识别;对YOLO v5模型加入SENet、CBAM、ECA三种注意力模块改进网络结构,提高模型的识别能力;设计明暗试验和密集场景试验进一步验证模型在复杂场景下的鲁棒性。[结果]YOLO v5+ECA模型的平均检测精度(mAP)为88.93%,相比YOLO v5提升了2.27%。在识别精度(AP)上,站立姿态为91.85%,休憩姿态为93.42%,饮水姿态为90.02%,梳羽姿态为80.42%。在明暗试验和密集场景试验中,YOLO v5+ECA模型性能表现稳定,漏检现象和误检现象相对较少。[结论]该模型可以实现养殖场复杂场景下肉鹅姿态准确快速检测,为后续肉鹅行为监控和健康防疫提供数据支撑。

摘要：【目的】为了提高鹅种蛋孵化性能,针对现有鹅孵化机孵化过程自动化程度低、温度波动大、鲁棒性差,现场操作复杂等不足,设计了一种基于可编程逻辑控制器(Programmable logic controller,PLC)和云平台的鹅孵化机监控系统。【方法】根据鹅种蛋孵化工艺要求和鹅孵化机工作原理,采用PLC作为主控制器设计了系统的硬件电路和软件程序,实现孵化机温度、湿度、翻蛋和喷水晾蛋的自动控制,利用触摸屏和组态软件设计了孵化机现场监控的人机交互界面,并利用通用分组无线业务(General packet radio service,GPRS)智能网关、云平台服务器和移动端设计了远程监控系统。系统工作时,GPRS智能网关读取PLC中的存储数据,通过4G/5G网将数据上传至云平台服务器,移动端通过微信公众号、APP或网页可以直接访问和下载云平台服务器中的数据,并以图表形式显示出来。【结果】该监控系统运行稳定、状态良好;孵化过程中的温度采样数据鲁棒性高,100%达到控制要求;自动控制有助于提高鹅孵化机自动化水平;孵化生产试验结果表明,狮头鹅受精蛋平均孵化率为87.84%,比现有记载最高纪录高1.44%。【结论】该系统能够满足鹅种蛋孵化要求,且控制精度高,实现了鹅孵化机的自动控制、现场监控和远程监控,具有良好的人机交互界面,对促进农业装备自动化和信息化发展具有指导意义。

摘要：本研究利用RT-PCR检测LncRNA-NEAT1基因表达在细胞中的亚定位,采用5′RACE获得LncRNA-NEAT1基因的转录起始位点;利用CRISPOR软件对-300~0 bp区域的LncRNA-NEAT1启动子序列设计sgRNA并构建到px330载体,通过转染细胞与T7E1酶切验证sgRNA效率;利用酶切和亚克隆方法将dCas9-KRAB-BSD片段替换px330载体的Cas9序列,形成重组px330-dCas9-KRAB载体;将验证有效的sgRNA构建到px330-dCas9-KRAB载体,形成px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体。添加不同质量浓度的Blasticidin S处理细胞,以最小致死质量浓度来确定筛选质量浓度。转染px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体并用Blasticidin S筛选细胞7 d后进行LncRNA-NEAT1基因的表达检测,同时对sgRNA在LncRNA-NEAT1基因启动子上的结合位点进行Sanger测序,以进一步验证上述结合位点是否发生切割。结果显示LncRNA-NEAT1主要表达于细胞核,而在细胞质中几乎不表达。5′RACE获得了LncRNA-NEAT15′端大约270 bp的序列。qPCR检测结果显示,与对照组相比,sgRNA1和sgRNA2能够显著抑制LncRNA-NEAT1的表达(P<0.05)。Sanger测序结果表明sgRNA1和sgRNA2所在的位点并没有发生碱基缺失和插入。研究结果为后续进一步研究LncRNA-NEAT1在先天性免疫反应中的功能奠定了基础。

摘要：试验旨在研究饲粮中添加3种锌源对断奶仔猪生长性能、腹泻率、肠黏膜形态及肠道菌群多样性的影响。选择144头体重为(7.0±0.2) kg的杜×长×大三元杂交仔猪,按胎次一致、体重相近原则,采用随机区组设计分为4组,每组6个重复,每个重复6头(公母各半)。对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加3 000 mg/kg普通氧化锌、1 500 mg/kg纳米氧化锌、600 mg/kg蒙脱石负载型氧化锌(均以锌计)。预试期7 d,试验期14 d。结果表明:与对照组、普通氧化锌组和纳米氧化锌组相比,蒙脱石负载型氧化锌组提高了断奶仔猪平均日增重(P<0.05),耗料增重比和腹泻率均降低(P<0.05),且回肠食糜中锌含量增加(P<0.05);与对照组、普通氧化锌组和纳米氧化锌组相比,蒙脱石负载型氧化锌组断奶仔猪十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度增加(P<0.05),回肠和结肠中大肠杆菌、沙门氏菌的数量降低(P<0.05),且回肠和结肠中优势菌群以乳杆菌属为主(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加600 mg/kg蒙脱石负载型氧化锌在提高断奶仔猪生长性能、降低腹泻率、改善肠道菌群、肠黏膜形态等方面均优于添加3 000 mg/kg普通氧化锌和1 500 mg/kg纳米氧化锌,而且锌添加量大大降低,可减少环境污染,是高锌饲粮理想的替代品。

摘要：旨在研究藏獒的起源、分类地位,及其与世界上其他大型家犬品种间的系统发育关系,根据家犬线粒体基因组序列设计引物,扩增藏獒线粒体3个细胞色素氧化酶亚基基因(COⅠ、COⅡ和COⅢ)的全序列,并以大熊猫为外类群,运用邻接法和最大似然法分析包括藏獒在内的20个犬科动物的系统发育关系。结果发现,藏獒线粒体基因组中COⅠ、COⅡ和COⅢ长度分别为1 545、684和784 bp,分别编码514、227和261个氨基酸;系统发育分析发现,藏獒、12个家犬品种与灰狼聚在一起,说明藏獒与家犬亚种内其他家犬品种一样起源于灰狼;家犬亚种内的13个家犬品种可以分为3大类,藏獒与圣伯纳犬、英国老式牧羊犬、兰伯格犬聚为一类,说明藏獒与圣伯纳犬、英国老式牧羊犬、兰伯格犬的亲缘关系较近,从分子水平上证实圣伯纳犬等大型家犬品种可能含有藏獒的血统。由此得出结论:藏獒起源于灰狼,在动物学分类地位上属于食肉目、犬科、犬属、狼种、家犬亚种;圣伯纳犬等大型家犬品种在品种形成过程中可能引入了藏獒的血统。

摘要：SIRT1基因对细胞的生存、衰老、凋亡等生理活动起着十分重要的调节作用。为了建立荧光定量PCR技术检测猪SIRT1基因表达量,根据GenBank中猪SIRT1 mRNA序列设计引物,建立基于SYBR Green I染料技术的荧光定量PCR检测方法。结果表明,所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感和特异性强等特点,为猪SIRT1基因定量分析提供了技术平台。

摘要：应用逆转录多聚酶链反应技术，参照 Ｂｏｕｒｓｎｅｌｌ等发表的鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列，自行设计并合成１对引物，应用该引物，从感染ＩＢＶ金坛株的第五代ＳＰＦ鸡胚尿囊液中扩增出片段大小为８２８ｈｐ的ＪＴ株 Ｎ基因，与设计相符，表明扩增片段为 ＩＢＶ ＪＴ株 Ｎ基因。将扩增片段与 ｐＧＥＭ－ Ｔ Ｅａｓｙ载体连接，经核酸序列测定，与Ｇｅｎｅｂａｎｋ中报道的ＩＢＶ其它株Ｎ基因同源性较高。

摘要：根据已发表的猪Sar1b基因序列设计合成1对带有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,用RT-PCR方法从猪肝脏组织总RNA中扩增出Sar1b基因cDNA序列,纯化后,经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1(+)-Sar1b重组载体。通过菌液PCR、双酶切及DNA直接测序分析,证实重组表达载体pcDNA3.1(+)-Sar1b构建成功。