摘要：目的利用小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒转染HTB-94软骨肉瘤细胞，观察其在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中对肿瘤细胞生长的影响。方法设计并合成高泳动家族性别决定基因9（Sox9）siRNA，将其转染HTB-94肿瘤细胞，观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达、生长曲线和细胞凋亡情况。结果Sox9siRNA的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致，Sox9基因的mRNA和蛋白表达降低，HTB-94肿瘤细胞的生长繁殖受到抑制，细胞凋亡增加。结论Sox9siRNA表达质粒可以通过稳定转染HTB-94肿瘤细胞，抑制Sox9基因的mRNA和蛋白的表达，抑制肿瘤细胞的生长繁殖，同时使肿瘤细胞凋亡。

摘要：目的:利用小干扰阻断目的基因的原理将构建的目的基因Sox9的pSilencer3,1-H1 neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94,观察目的基因被阻断后肿瘤细胞目的基因的表达、肿瘤细胞生长和凋亡所受到的影响。方法:设计并合成Sox9(siRNA),鉴定后将其转染HTB-94肿瘤细胞,观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达的变化,以及被转染肿瘤细胞的生长曲线和肿瘤细胞凋亡的情况。结果:Sox9(siRNA)的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,被转染的HTB-94Sox9基因的mRNA的表达量下降了35.4%,蛋白的表达量下降了31.3%;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞24h和96h的光吸收值分别为0.146±0.037和0.412±0.036,而正常对照细胞组两个同样时间段的光吸收值分别为0.152±0.0367和0.607±0.029。其中细胞生长增殖速度的差异为32.0%,肿瘤细胞的生长明显受到抑制;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞的干扰组细胞凋亡率为39.2%;而未经干扰的HTB-94肿瘤细胞的细胞凋亡率为0.1%。结论:经过设计合成的Sox9(siRNA)表达质粒可以稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞,被Sox9(siRNA)表达质粒转染的人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞Sox9基因的mRNA和蛋白的表达都受到抑制,同时肿瘤细胞的生长繁殖也受到明显抑制,肿瘤细胞的凋亡明显增加。

摘要：目的构建针对目的基因PTHrp的pSilencer3.1-H1neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒,并在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中观察其干扰效果。方法设计并合成针对PTHrP基因编码区的含有发卡结构的互补的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamHⅠ,HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3.1H1neo中,对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定。结果双酶切证实PTHrP siRNA表达质粒克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,同时干扰了PTHrP基因的mRNA和蛋白的表达。结论成功构建的靶向RNA干扰重组表达质粒,可以通过小RNA序列干扰靶向基因的mRNA转录,降低靶向基因在细胞中mRNA和蛋白的表达。