摘要：目的建立武乡病毒(wuxiang virus,WUXV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载WUXV的全部基因序列,使用MEGA-X完成多序列比对分析,选择针对S段基因高保守区设计的引物和探针,分别对检测反应的特异性、灵敏性和稳定性进行评价。结果建立的方法可以特异性地检测WUXV,并且与多种虫媒病毒无交叉反应;反应的灵敏度较高,最低检测下限为1 pfu/ml;同一样品重复检测循环阈值(Ct)的批间变异系数均小于1.00%;用本研究建立的TaqMan RT-PCR检测30批白蛉核酸样本,其中7批出现WUXV阳性扩增曲线。结论本研究建立了灵敏度高、特异性强、重复性好的TaqMan RT-PCR方法可用于WUXV的大批量样本筛查。

摘要：以16S rRNA、ask、mapA和cstA基因为靶基因,基于软件设计引物,建立牛源弯曲菌多重PCR检测方法。通过反应条件的优化以及引物特异性、灵敏度的验证,并与其他方法进行临床样品的检测效率比较,建立同时检测3种牛源致病弯曲菌的多重PCR方法。结果表明:扩增的目的条带处出现与预期大小相符的单一明亮条带,引物序列与NCBI的Primer-Blast库已有的菌株同源性均大于99%。应用建立的多重PCR方法对牛养殖场、屠宰场的样品进行检测,同时使用传统平板分离法及现有报道的其他PCR方法进行对比验证,在1375份样品中,多重PCR检测方法、传统平板分离法及其他PCR方法的检出率分别为5.45%(75/1375)、4.87%(67/1375)和5.31%(73/1375),但3种方法的检出率无显著差异。多重PCR方法与现有报道的PCR方法在DNA水平上的最低检测限:空肠弯曲菌分别为19.23、0.93 pg·μL^(-1),结肠弯曲菌分别为16.93、1.05 pg·μL^(-1),胎儿弯曲菌分别为14.37、0.23 pg·μL^(-1)。多重PCR方法检测流程需1~2 d,且可同时检测3种弯曲菌。而现有报道的PCR方法检测流程需1~2 d,还需制备不同体系分别验证,材料成本更高,传统平板分离法鉴定耗时更久,需5~7 d。这一研究建立的多重PCR检测方法优势表现为操作方便、灵敏度和特异性较高,能同时检测牛源弯曲菌常见种属,可满足牛源弯曲菌规模化检测的需求。

摘要：沙门菌是一种重要的人兽共患病原菌,不仅可以感染畜禽,而且还可以感染人类。鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等感染家禽后可以引起禽沙门菌病,导致隐性带菌感染,甚至引发死亡,给养禽业带来巨大的经济损失。沙门菌感染的家禽及其污染的产品是食源性沙门菌的主要来源之一,不仅阻碍了家禽相关产业的发展,而且也对人类健康构成了巨大威胁。疫苗的使用是防控沙门菌的手段之一,但是疫苗并不能完全有效地控制沙门菌的感染和传播。阐明沙门菌诱导家禽免疫应答规律有助于疫苗的理性设计。文章就沙门菌在家禽中的免疫应答研究进展进行了总结,为禽沙门菌疫苗的研制提供参考。