摘要：[目的]来源于黏细菌Myxococcus sp.V11的海藻糖合酶(trehalose synthase,EC 5.4.99.16)TreSI可通过转糖苷作用将麦芽糖转化成为海藻糖,在酶法生产海藻糖上有很高的应用前景,其热稳定性是制约该酶工业应用的关键。本文旨在通过定点突变对TreSI相关氨基酸残基进行改造,以期获得热稳定性强的突变子,提高其应用潜力。[方法]使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1对TreSI每个氨基酸突变后的去折叠自由能变化(ΔΔG)进行初步预测,以SDM(site directed mutator)和mCSM(mutation cutoff scanning matrix)以及两者联合(Duet)进行预测。用重叠延伸PCR法构建11个海藻糖合酶突变体,经大肠杆菌表达和蛋白纯化后,对其酶学特性进行表征。[结果]成功筛选到2个热稳定性提高的突变子。突变子R149L、N193E的比酶活与野生型无显著差异,且最适pH值和最适反应温度也未发生改变;R149L、N193E在50℃处理1 h的残余酶活性为野生型的1.37和2.50倍;在60℃处理1 h的残余酶活性为野生型的2.41和4.32倍。[结论]本研究利用PoPMuSiC结合SDM、mCSM模拟的设计策略提高了TreSI的耐热性,为工业应用提供了新的酶资源,也为其他工业酶的定向改造提供了参考。

摘要：【目的】胶原蛋白具有特殊的三螺旋结构,对常见的蛋白酶具有抗性,只能被特定蛋白酶(胶原蛋白酶)水解。微生物胶原蛋白酶由于其较低的要求和较高的生产率,在胶原废物的高值化利用中发挥着重要作用。本研究拟通过单因素优化及响应面法优化,提高胶原蛋白酶产生菌的产酶量。【方法】通过单因素试验探究培养时间、温度、pH、接种量、装液量、碳源、氮源及金属离子等对胶原蛋白酶产生菌Bacillus ***-23的产酶影响;在此基础上利用PB试验筛选出显著影响因素,最后通过CCD试验确定最佳发酵产酶工艺条件。【结果】通过PB试验筛选出葡萄糖、酵母浸粉、接种量和Fe^(2+)等4个显著影响因素,通过响应面法确定了最佳产酶发酵工艺:培养时间36 h、培养温度37℃、培养基pH值8.0、接种量2.97%,葡萄糖19.60 g/L、酵母浸粉25.80 g/L、Fe^(2+)0.75 mmol/L、NaCl 10 g/L。在该优化条件下,Bacillus ***-23所产胶原蛋白酶活力达到28.13 U/mL,较优化前的酶活(5.94 U/mL)提高4.73倍。【结论】经过单因素、PB设计和响应面逐级优化,显著提高了Bacillus ***-23发酵产胶原蛋白酶的酶活,为该菌株工业化应用于胶原蛋白活性肽开发提供了理论基础。

摘要：由于丁醇对生产菌的抑制甚至毒害作用导致丙酮丁醇发酵过程中出现低产物浓度、低产率现象是目前生物法获取丁醇过程中亟待解决的一个关键科学问题。为获得高丁醇耐受性及高丁醇产量生产的菌株,该文采用自行设计的"三明治"筛选方法,从土壤中筛选出4株高丁醇耐受性菌株,其中菌株a914的发酵性能最佳,经P2培养基和木薯粉培养基发酵后其丁醇的产量分别为5.44和3.02 g/L。菌株a914经16S r DNA鉴定其与拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)的同源性高达99%,以及结合菌株a914的生理生化特性最终确定菌株a914为拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)。同时还对菌株a914的发酵性能进行了初步研究,试验结果表明,其最适的木薯粉浓度为80.0 g/L、酵母浸粉浓度为3.0 g/L、碳酸钙添加量为3.0 g/L,在此条件下丁醇和总溶剂产量分别达到6.73和9.83 g/L。

摘要：为了研究复合腐秆菌剂对稻草好氧堆肥的影响,采用好氧堆肥技术,设计了不接菌(对照)和接种复合菌剂2个处理,探讨堆肥过程中堆体温度、pH、有机质、C/N、发芽指数的变化。结果表明,接种复合腐秆菌剂堆体初期温度上升迅速,最高温度达到60℃,高温发酵阶段维持了12 d;与对照相比,接种复合腐秆菌剂对pH值、容重与孔隙度、有机质、C/N变化影响不大;但增加堆体全氮的含量,提高堆肥产品的质量,种子发芽率在第20天迅速上升,最大值为93%。显然接种复合腐秆菌剂促进好氧堆肥迅速起温,提高了堆肥的腐熟质量。

摘要：【目的】获得可同步利用混糖发酵的丁醇高产菌株。【方法】首先采用实验室自行设计的“三明治”筛选方法,从自然界中筛选出一株高丁醇占比生产菌株,然后利用丁醇胁迫驯化及常压室温等离子体诱变技术对其进行复合诱变处理,最后,对原始菌株及突变菌株的各项发酵性能进行比较。【结果】筛选所得原始菌株L8经16S rDNA分子生物学鉴定为拜氏梭菌。通过复合诱变技术及理性筛选模型获得了一株丁醇高产突变菌株Y10,当以混糖为发酵底物时,可产生10.51 g/L丁醇及12.16 g/L总溶剂,较原始菌株分别提高了38.6%及33.5%。通过比较原始菌株L8与突变菌株Y10在不同碳源条件下的发酵性能发现,突变菌株Y10在混糖条件下的丁醇生产强度可达到0.14 g/(L·h),较原始菌株提高了40%,且其总糖代谢速率达到0.61 g(/L·h),较原始菌株提高了24.5%。【结论】经复合诱变处理获得的突变菌株发酵性能得到较大提高,所采用的复合诱变方法及理性筛选模型可为其它试验或工业生产中快速获得优良生产菌株提供有益的参考。

摘要：采用改良MRS固体培养基,利用稀释平板涂布法从健康奶牛新鲜粪便中分离筛选到一株肠道乳酸菌,经16S rDNA鉴定为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),并暂命名为发酵乳杆菌JN-2。为提高发酵乳杆菌JN-2的生物量,首先单因素试验设计对碳源、氮源、微量元素的种类进行了优化,并进一步利用正交设计确定了最佳发酵培养基配方:葡萄糖30 g/L、酵母浸粉40 g/L、硫酸镁0.25 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、柠檬酸氢二铵2 g/L、乙酸钠5 g/L、吐温-80 1 mL/L。在该优化发酵培养基下,发酵乳杆菌JN-2的菌体生物量吸光光度值达到1.79。

摘要：阿拉伯糖苷酶协同木聚糖酶在低聚木糖的生产、废物的生物处理、食品或饲料养分的提高以及半纤维素的生物转化等方面起着非常重要的作用。噬几丁质细菌是可以滑动并形成粘孢子的革兰氏阴性细菌,因具有较强的几丁质酶活性而得名。采用PCR方法从噬几丁质菌株***-1基因组DNA中克隆出编码阿拉伯糖苷酶基因ara1805,以pET29a为表达质粒,与其C末端6个组氨酸标签序列融合,在大肠杆菌中得到高效可溶性表达。SDS-PAGE测得酶的分子量为38 ku,与理论推算值相吻合。表达菌株粗酶经检测表现出α-L-阿拉伯糖苷水解酶活性。蛋白质序列分析和其他来源的阿拉伯糖苷水解酶表明Ara1805中可能存在的活性中心为Asp67,Glu186和Asp236,说明该蛋白确实可能具有阿拉伯糖苷酶功能。研究为今后理性设计阿拉伯糖苷水解酶以期提高其水解活性奠定了一定的理论基础。

摘要：选用松柏外生菌根真菌松乳菇(Lactarius deliciosus)为对象,研究该菌最适碳源、氮源、无机盐、生长因子及培养基优化。结果表明:松乳菇的最适碳源为蔗糖,菌丝干重为0.49 g;最优氮源为蛋白胨,菌丝干重为0.68 g;MgSO_4、维生素B_1对菌丝生长的促进作用最为明显,其菌丝干重分别为0.42 g、0.48 g。二次正交旋转设计试验得出该菌最适培养基配方为蔗糖37.42 g/L、蛋白胨3.13 g/L,MgSO_4 0.1 g/L,VB1 25 mg/L,pH为7。

摘要：本文通过分析江西农业大学高校日常管理现状,创新成立学生教学管理委员会,通过自主设计调查问卷的反馈结果分析,发现学生教学管理委员会的成立能够加快以学生为主体的教学管理改革进程,充分调动学生参与的积极性,提升学生综合能力及就业竞争力,实现高校教学管理科学民主化。

摘要：【目的】作为构成羽毛主要成分的角蛋白,因其存在大量相互交联的二硫键、氢键和盐键等化学键,导致羽毛结构稳定难以被常规手段降解。相较于物理、化学方法降解废弃羽毛,利用微生物产生的角蛋白酶使废弃羽毛变成可再生资源,具有高效、环保的优点。课题组前期从家禽养殖场的土壤中分离、筛选到一株羽毛降解菌,经鉴定该菌株为中间苍白杆菌JY-25。研究旨在进一步提高中间苍白杆菌JY-25的羽毛降解率,为今后工业化降解废弃羽毛提供依据。【方法】依次采用单因素试验、Plackett-Burman试验设计和响应面法对中间苍白杆菌JY-25的羽毛降解培养基进行优化。【结果】通过单因素试验确定了在降解培养基中外加碳源(糊化淀粉)和氮源(玉米粉)时,都能提高羽毛的降解率。Plackett-Burman试验设计发现降解培养基的8种成分中,糊化淀粉、硫酸亚铁和羽毛量是影响中间苍白杆菌JY-25对羽毛降解率的显著因素。最后通过响应面法确定了最佳降解培养基的组分为:羽毛2 g/L、糊化淀粉15 g/L、玉米粉10 g/L、硫酸亚铁0.02 g/L、磷酸氢二钾1.5 g/L、氯化钠0.3 g/L、硫酸镁0.025 g/L、氯化钙0.025 g/L,在该优化的培养基配方下,菌株JY-25的羽毛降解率高达76.31%,相较于初始的降解率提高了24.4%。【结论】经过多种优化方式,显著地提高了中间苍白杆菌JY-25的羽毛降解率,为菌株用于工业化降解废弃羽毛提供了理论基础。