摘要：目的:探讨沙门菌质粒毒力基因(spv)表达改变对鼠伤寒沙门菌耐药表型的影响。方法:在e GFP基因序列上下游增加启动子及终止子并在两端位点上、下游设计酶切位点,以p ACYC184-e GFP为载体,构建spv基因回补质粒,电转化至前期构建的鼠伤寒沙门菌spv B及spv C基因共同缺陷株获得基因回补株,检测菌株间耐药性的差异及acr AB表达的差异。结果:成功构建鼠伤寒沙门菌spv B、spv C基因荧光回补株,连续培养12代质粒未发生丢失。与野生型菌株及回补株相比,spv基因缺陷变异株对哌拉西林他唑巴坦、头孢噻肟、头孢西丁、四环素、氯霉素及环丙沙星的MIC值下降。spv基因缺陷变异株Acr A周质蛋白水平低于野生菌株及回补株(P<0.05)。结论:在spv B及spv C基因共同缺陷鼠伤寒沙门菌基础上的基因回补株构建成功,spv下调能改变鼠伤寒沙门菌的耐药表型,这可能是通过影响外排泵Acr A来完成的。

摘要：背景进行性肌营养不良(PMD)中Duchenne型肌营养不良(DMD)和Becker型肌营养不良(BMD)的临床表现、治疗和预后差异明显,目前国内外对症状前期PMD患儿的诊断尚无共识。目的探讨婴幼儿时期症状前期PMD患儿的临床特征和实验室检查特点,并探讨血清肌酶水平在DMD和BMD分型诊断中的价值。设计病例系列报告。方法收集2016年1月至2020年7月江西省儿童医院确诊的症状前期PMD患儿,分析临床特征和实验室检查特点,并以基因检测结果为诊断标准分为DMD组和BMD组,血清肌酶通过ROC曲线分析以约登指数最大值时的取值作为诊断界值,比较不同肌酶的诊断准确性。主要结局指标PMD患儿的临床表现、基因结果、血清酶水平(AST、ALT、LTH、CK、CK-MB)。结果24例PMD患儿纳入分析,其中DMD组18例,BMD组6例。22例(91.7%)因发现转氨酶升高就诊,2例(8.3%)因亲戚确诊前来就医。PMD患儿CK-MB、CK、LDH、AST和ALT水平均明显升高,DMD组均高于BMD组(除AST外,P均224.5 U·L^(-1)、CK>11069 IU·L^(-1)、CK-Mb>204 IU·L^(-1)、LDH>1349.5 IU·L^(-1)时为DMD的可能性更高,尤其是LDH>1349.5 IU·L^(-1)具有高度特异性。结论血清肌酶水平增高为PMD患儿症状前期的主要表现。LDH>1349.5 IU·L^(-1)对诊断DMD具有高度特异性。

摘要：目的为深入研究鼠伤寒沙门菌毒力基因spvB的功能,制备鼠伤寒沙门菌spvB基因完全缺陷变异株,观察spvB基因缺陷株在体外酸性环境中的生存能力。方法根据鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,设计PCR特异性引物,制备spvB基因缺陷性同源性核苷酸片段,导入自杀质粒pCVD442后再导入鼠伤寒沙门菌野生株,进行同源重组,用PCR方法观察重组现象,将完全重组的菌株作为spvB基因的缺陷变异株,并通过核苷酸序列分析加以确定。绘制生长曲线,对比spvB基因缺陷变异株与野生株在酸性条件下的生存情况。结果 PCR及序列分析证实,缺陷变异株的spvB基因缺失1 749bp。酸性条件下培养1h及2h后,野生株的活菌数高于spvB基因缺陷株,差异有统计学意义(P<0.05);且野生株在酸性环境中的生存率明显高于缺陷株,野生株在1h及2h后的生存率分别为85.6%、74.9%,缺失株分别为68.0%、42.3%。结论成功构建鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷变异株,并发现在酸性条件下其生存能力明显降低,为进一步研究其在鼠伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。

摘要：目的:为进一步研究鼠伤寒沙门菌毒力基因spvC的功能,制备鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株。方法:根据鼠伤寒沙门菌spvC基因序列,设计PCR特异性引物,制备spvC基因缺陷性同源性核苷酸片段,导入自杀质粒pCVD442后再导入鼠伤寒沙门菌野生株,进行同源重组,用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为spvC基因的缺陷变异株,并通过核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的spvC基因缺失711个碱基。结论:成功构建鼠伤寒沙门菌spvC基因缺陷变异株,为进一步研究其在鼠伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。

摘要：目的对不同基因型HBV的大S蛋白进行生物信息学比较研究，并分析其意义。方法从Gen—Bank中获取不同基因型（A～J）HBV的大S蛋白核苷酸与氨基酸序列，采用Clustal X，Bioedit软件进行核苷酸和氨基酸序列比对，计算核苷酸和氨基酸同源性，应用在线软件TMHMMv2．0以及AntheProt5．0软件分析大S蛋白跨膜区、信号肽与二级结构。结果不同基因型大S蛋白基因核苷酸同源性为83．0％～95．3％，氨基酸同源性为79．5％～95．5％；preS1功能结构域（氨基酸1～75）含有多个高变异位点（氨基酸3、氨基酸28、氨基酸40、氨基酸43和氨基酸73）；S蛋白有4次跨膜，S蛋白膜外功能结构域（氨基酸99～172）较保守，含有多个保守的半胱氨酸残基位点；S蛋白中存在潜在信号肽结构，氨基酸27和氨基酸98为潜在信号肽断裂位点；不同基因型大S蛋白均富含潜在仪螺旋、B折叠和卷曲结构。结论不同基因型HBV大S蛋白中差异较大区域是preS1，而S区相对较保守，为抗HBV药物设计、基因工程疫苗改良和HBV的致病机制等的研究提供依据。