摘要：背景:到目前为止,国际上通用的动物胚胎干细胞细胞系大多是从129品系和C57BL/6系小鼠中获得的,少部分来自BALB/C系,来自于中国昆明鼠则鲜有报道。目的:分离培养昆明系小鼠胚胎干细胞,并对其生物学特性进行初步鉴定。设计、时间及地点:以细胞为对象的观察性实验,于2006-05/2007-06在南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所完成。材料:昆明小鼠3.5d胚龄的囊胚。方法:自昆明系小鼠3.5d胚龄的囊胚分离内细胞团细胞,接种于小鼠原代胚胎成纤维细胞饲养层上,对分离的内细胞团细胞进行扩增、传代培养。主要观察指标:观察胚胎干细胞集落的生长情况,对其碱性磷酸酶表达进行染色分析,采用免疫荧光法检测其阶段特异性胚胎抗原1表达,以反转录-聚合酶链反应检测其特异性表达因子c-Myc,Nanog,Oct3/4和Sox2的基因表达情况,并对其体内外分化能力对进行鉴定分析。结果:分离、培养自内细胞团的细胞呈典型的胚胎干细胞集落样生长,碱性磷酸酶染色及阶段特异性胚胎抗原1荧光染色阳性,细胞表达c-Myc,Nanog,Oct3/4和Sox2等基因,细胞在体内外均能分化成来源于不同胚层的多种细胞类型。结论:成功从昆明小鼠囊胚中分离并建立一株胚胎干细胞系,其生物学特性与其他胚胎干细胞株相符。

摘要：背景:芳香族聚酯生物降解性很差,不能单独作为降解材料使用,南昌大学材料科学与工程学院通过对苯二甲酰氯、双酚A、己二醇和低聚乳酸通过熔融共缩聚和酯交换的方法合成出一种新型生物可降解材料——芳香/脂肪共聚酯,已申请专利。目的:观察芳香/脂肪共聚酯生物材料与大鼠骨髓间充质干细胞的相容性。设计、时间及地点:细胞-材料学体外实验,于2006-04/2007-04在南昌大学第一附属医院泌外研究所完成。材料:健康雄性SD大鼠5只,由江西中医学院实验动物中心提供。生物可降解聚酯材料为本项目小组正在研制的一种新的脂肪族/芳香族共聚脂。方法:通过溶液浇铸法将可降解聚酯(聚对苯二甲酸双酚A酯-co-对苯二甲酸己二酯-co-乳酸)材料制备成共聚酯生物膜,同法制备聚氯乙烯生物膜。将共聚酯生物膜消毒后浸于细胞培养基中,收集材料浸提液,过滤灭菌保存,同法制备聚氯乙烯浸提液。取第三四代大鼠骨髓间充质干细胞,以2×107L-1密度接种于96孔板中,以1.3×105个/孔接种于含上述制备的无菌共聚脂生物膜的24孔板内。分为3组:①阴性对照组,单纯加入DMEM培养基。②实验组,在加入DMEM培养基的基础上,分别加入12.5%,25%,50%,100%的材料浸提液。③阳性对照组,在加入DMEM培养基的基础上,加入聚氯乙烯浸提液。主要观察指标:通过中性红摄取法、碱性品红染色法、MTT还原检测法,对材料毒性进行评价,电镜观察细胞在生物膜上的生长情况。结果:培养1,3,5,7d后,阳性对照组细胞活力及代谢能力有不同程度的下降(11%～16%);实验组与阳性对照组吸光度值比较差异有显著性意义(P0.05)。电镜扫描及吖啶橙/溴化乙啶染色结果显示,接种第1天骨髓间充质干细胞即可附着在共聚酯生物膜表面呈梭形生长,随时间的延长细胞逐渐增多,表现出良好的附着性,凋亡及坏死率较低。结论:初步证明芳香/脂肪共聚酯生物材料对细胞生长无毒性作用,且具有较好的细胞相容性,基本符合生物材料的应用要求。

摘要：背景:骨髓间充质干细胞是一种存在于骨髓内的非造血干细胞,因其具有自我更新能力及多向分化潜能,且分离培养方法成熟,在组织器官修复及再生方面显示出良好的应用前景,将为终末期肝病的治疗如生物人工肝及肝细胞移植提供新的细胞来源,但目前人骨髓间充质干细胞向肝系细胞诱导分化培养体系尚不成熟。目的:观察肝细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子联合应用诱导人骨髓间充质干细胞在体外向肝系细胞分化的可能性。设计:开放性实验。单位:南昌大学第一附属医院传染科与泌尿外科研究所。材料:实验于2004-07/2005-03在南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所完成。所用骨髓由成年健康志愿者提供(均对本实验知情同意)。DMEM/F12培养基(Gibco公司);表皮细胞生长因子,肝细胞生长因子,胰岛素,转铁蛋白,鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体,FITC-兔抗鼠IgG(Sig-ma公司);碱性成纤维细胞生长因子(Invitrogen公司);鼠抗人角蛋白18,19单克隆抗体(Chemicon公司);胎牛血清(杭州四季青)。方法:以骨髓腔穿刺方式抽取成年健康志愿者髂后上棘处骨髓10mL,采用密度梯度离心法分离和反复贴壁法纯化骨髓间充质干细胞。取培养至4～8代细胞,消化后以107L-1接种到放置20mm×20mm爬片的预先铺被有0.1%明胶的24孔板中,次日换液,改用无血清DMEM/F12培养基(含20μg/L的表皮细胞生长因子和10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子)培养2d后,换成无血清DMEM/F12培养基(含20μg/L的肝细胞生长因子,10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子,5mg/L的胰岛素,5mg/L的转铁蛋白)进行诱导分化,每3d换液1次,以未加入肝细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞作为对照组。骨髓间充质干细胞诱导培养过程中,放射免疫荧光法测甲胎蛋白浓度。诱导当天及第7,14,21,28天,取诱导细胞爬片,细胞免疫荧光法检测肝细胞表面标志物甲胎蛋白、角蛋白18和角蛋白19的表达,并进行糖原染色检测诱导细胞的糖原合成情况。主要观察指标:①细胞形态学观察。②培养上清液中甲胎蛋白表达量的测定。③肝细胞表面标志检测结果。④诱导细胞的糖原合成情况。结果:①诱导第14天可观察到细胞变成短梭形和多角形,随培养时间的延长多角形细胞增多,并可形成肝细胞样的细胞集落。②诱导第14天培养上清液内可检测到甲胎蛋白的分泌,每孔浓度为0.1μg/L;第17天达高峰0.4μg/L;第21天下降至0.3μg/L。③诱导第14天甲胎蛋白、角蛋白18表达呈阳性,第28天角蛋白19表达呈阳性。④诱导第21天糖原染色呈阳性反应。结论:肝细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子能够诱导人骨髓间充质干细胞在体外向肝细胞分化,表达肝细胞特异性表面标志,并具有合成糖原、分泌甲胎蛋白的功能。

摘要：背景:干细胞特异性基因Oct-4在维持干细胞功能和调节干细胞的分化过程中起着关键性作用,了解前列腺癌干细胞中Oct-4的表达,对前列腺癌的预后、复发和耐药的评估具有重要意义。目的:观察Oct-4在激素非依赖性前列腺癌干细胞中的表达。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02/10在南昌大学第一附属医院中心实验室完成。材料:取12例前列腺癌患者手术后组织标本,其中6例在手术前没有经过化疗和激素治疗,另外6例患者经过激素治疗出现抵抗而手术。方法:制备前列腺癌组织单细胞悬液,流式细胞仪分选未经治疗前列腺癌和治疗后出现耐药的前列腺癌干细胞,RT-PCR和Western blot检测激素非依赖性前列腺癌Oct-4基因和蛋白的表达。主要观察指标:激素依赖和非依赖性前列腺癌CD133+/CD44+以及CD133-/CD44-细胞的比例;Oct-4基因和蛋白在激素非依赖性前列腺癌CD133+/CD44+、CD133+/CD44-、CD133-/CD44+、CD133-/CD44-细胞的表达。结果:流式细胞仪检测显示未经过治疗的前列腺癌CD133+/CD44+细胞占(0.83±0.21)%,而CD133-/CD44-细胞多达(95.62±1.35)%;治疗出现激素抵抗的前列腺癌CD133+/CD44+细胞为(54.62±0.86)%,而CD133-/CD44-细胞为(9.56±0.47)%;与其他亚群细胞相比,激素非依赖性前列腺癌CD133-/CD44-细胞Oct-4基因和蛋白显著降低(P0.05)。结论:Oct-4在激素非依赖性前列腺癌干细胞中高表达,可能与前列腺癌的预后和耐药有关。

摘要：目的通过使用床旁引流记录表,对实施效果进行调查分析,并得出结论,为今后提供便捷服务,提高护理质量,保障患者安全提供参考信息。方法自行设计床旁引流记录表,采用整群抽样的方法,选取2015年10月~2016年2月南昌市第一医院泌尿外科病区第一医疗组诊治并留置引流管的患者200名,以住院号单、双号的形式将其分为实验组和对照组,每组各50例。对照组仅实施常规的引流护理并按江西省卫计委护理书写规范进行记录;实验组患者除实施常规的引流护理和记录外,同时使用床旁"引流记录表"。以南昌市第一医院护理书写质控检查得分、医生查房花费的时间以及患者对护理服务的满意度为客观评价指标,对实施床旁"引流记录表"的效果进行评价。结果实验组与对照组患者护理记录的书写质控检查得分分别为(94.32±2.87)和(89.63±3.36)(t=4.86,P<0.05);医生为每位患者查房花费的时间分别为(3.05±0.87)min和(5.40±1.54)min(t=-13.31,P<0.05);患者对护理服务的满意度,实验组为92.22%,对照组为81.11%,两组患者的满意得分比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论实施床旁引流记录表有利于提高护理记录的准确率、医生查房的工作效率以及患者对护理服务的满意度。

摘要：背景:研究发现外源性骨髓间充质干细胞能够定居于肾脏并且分化为肾脏细胞,参与损伤肾组织的修复,但对其修复作用途径尚无公认。目的:探讨外源性骨髓间充质干细胞移植对肾损伤的可能治疗作用。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2007-03/09在南昌大学泌尿外科研究所完成。材料:清洁级SD大鼠56只。雄鼠8只用于制备骨髓间充质干细胞,雌鼠48只随机分为细胞移植组、模型对照组、假手术组,16只/组。荧光染料DAPI为Biotium Inc产品,蓖麻血凝素为Vector Laboratories产品,BrdU为Sigma产品。方法:以密度梯度离心法分离鼠骨髓间充质干细胞,加入DAPI进行标记,调整细胞数为1.5×1010L-1。细胞移植组、模型对照组建立缺血再灌注肾损伤模型,假手术组开腹后不予结扎肾血管。缺血45min后,细胞移植组经下腔静脉注入用DAPI标记的骨髓间充质干细胞悬液1mL,模型对照组、假手术组输入1mL无菌生理盐水。移植后各组每天腹腔注射BrdU,其后留取血标本和肾组织。主要观察指标:荧光显微镜及免疫组织化学染色观察移植细胞在肾组织中的分布,采用能与肾小管内腔壁特异结合的蓖麻血凝素鉴定移植细胞的分化,以免疫组化方法检测Brdu反映肾组织细胞的增殖状况,检测血清肌苷、尿素氮水平。结果:移植后第3天可见少量DAPI阳性细胞,第4天DAPI阳性细胞数明显增加(P<0.05),且多数DAPI标记细胞能结合蓖麻血凝素,DAPI阳性细胞主要分布于肾脏外髓质肾小管中,肾皮质和内髓质阳性细胞很少,而肾小球内则未见DAPI阳性细胞。假手术组肾组织细胞增殖非常弱,移植后第4天Brdu阳性细胞数明显低于模型对照组(P<0.05);移植后第2,3,4天细胞移植组Brdu阳性细胞均明显多于模型对照组(P<0.05),其分布类似于DAPI阳性细胞。与模型对照组比较,细胞移植组大鼠血清尿素氮水平移植后第1,2天明显降低(P<0.05);细胞移植组大鼠血清肌苷水平移植后第1,2,3天均显著降低(P<0.05)。结论:移植的外源性骨髓间充质干细胞能够迁移、定居于缺血再灌注损伤后的肾组织中并分化为肾小管上皮细胞;骨髓间充质干细胞移植可促进损伤肾脏本身的细胞增殖再生;对肾损伤后早期肌苷、尿素氮的升高具有一定抑制作用,这种早期对肾功能的保护与其迁移定居到肾脏局部、分化修复损伤的肾小管无关。