摘要：目的:以大学生基础医学创新研究暨实验设计竞赛为导向,探讨多层次实验教学模式改革的效果。方法:自2013年度起,在某医学院临床医学专业教学班公布实验开放安排,学生自愿报名。将生化实验项目分为开放性实验、综合设计性实验,把创新元素融入到实验的各个环节。在完成2个实验项目后,根据学生完成情况每年度筛选10~20名学生进入下一阶段学习——大学生创新项目实验,最终筛选出适合参赛的学生。对参赛的60名学生进行相关内容的问卷调查。结果:调查结果显示,所有学生均对开放性实验的内容及进度持满意态度,认为能提高解决问题的能力,有助于创新及动手能力的培养,并能激发科研兴趣;学生2017至2023年参加第三届至第九届全国大学生基础医学创新研究暨实验设计大赛,共获22项国家级奖项,14项分区赛奖项。2017年,10人考研,9人被录取;2018年12人考研,11人录取,其中1人在复试阶段逆袭成功;2019年14人考研,14人录取;历届考研率高达94%以上。结论:以大学生基础医学创新研究暨实验设计竞赛为导向建立的创新实验教学体系,能有效培养学生的创新能力,激发学生不断创新的科研兴趣,经过训练的学生能够较为轻松地应对科研及实际应用问题。

摘要：目的:应用RNA干扰技术设计构建针对血管内皮细胞生长因子受体KDR的小干扰RNA,并观察脂质体转染肺癌细胞A549后的干扰效果。方法:实验于2005-03/2006-01在沈阳医学院生物化学及分子生物学教研室完成。①设计针对KDR编码区有短发夹结构的3条mRNA序列,经退火成互补双链,克隆到pGCsi.H1/neo/GFP载体中构建3个重组质粒,分别命名为KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3。②设立5组:小干扰RNA组,分别转染KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3;阳性对照组,转染pGCsi.H1/neo/siGFP,该质粒载体中的插入序列为针对绿色荧光蛋白的小干扰RNA,不干扰待研究的内源性基因;阴性对照组,转染pGCsi.H1/neo/GFP/NON,该载体为不干扰任何内源性基因的小干扰RNA;空白对照组,转染pGCsi.H1/neo/GFP空载体;正常对照组,不进行任何转染。③对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析;脂质体法转染质粒至肺癌A549细胞株后,实时定量PCR检测KDRmRNA的水平变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线。结果:①小干扰RNA表达载体的鉴定:KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3表达载体用限制性内切酶NdeⅠ和SmaⅠ进行单酶切后,均产生约713bp、5480bp和2403bp、3790bp两个片段,与预期结果相同。测序结果与设计的编码相应短发夹状KDR-小干扰RNA的寡核苷酸序列一致,证明KDR-小干扰RNA真核表达载体构建成功。②KDR-小干扰RNA对A549细胞中KDRmRNA水平的影响:与阳性对照组、阴性对照组、空白对照组和正常对照组的A549细胞相比,KDR-siRNA1,2,3表达载体转染后的A549细胞KDR基因表达水平均明显受到抑制,抑制率分别为64%、81%和72%,其中以KDR-siRNA2抑制作用最为明显。③KDR-小干扰RNA对A549细胞生长的影响:阳性对照组、阴性对照组、空白对照组、正常对照组的A549细胞生长趋势较为一致,且生长速度均明显高于转染3种KDR-小干扰RNA表达载体的A549细胞,从接种第2天开始差异有显著性意义(t=15.29～17.65,P均<0.01)。结论:血管内皮细胞生长因子受体KDR靶向RNA干扰重组质粒构建成功,该载体能有效抑制肺癌A549细胞KDR基因表达与细胞增殖。

摘要：背景:铅暴露引起的动物学习记忆障碍与脑细胞中蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)活性改变是否有关系呢?目的:研究慢性铅暴露下发育期小鼠大脑组织PKC活性变化规律及其对小鼠记忆发育的影响。设计:以实验动物为研究对象,随机对照的验证性实验研究。单位:卫生部细胞生物学重点实验室。材料:实验在中国医科大学生物化学与分子生物学实验室完成。选择五六周龄昆明种小白鼠72只。方法:以不同浓度的醋酸铅饲喂交配后的雌鼠,其幼崽通过哺乳和直接饮水接触铅。在幼崽生后1d(P1),8d(P8),15d(P15),22d(P22),30d(P30)将其分别处死,取出脑组织。采用犤γ-32P犦ATP放射性磷标记法于体外测定铅暴露小鼠大脑组织的PKC的活性;另外取暴露于不同浓度醋酸铅的发育期小鼠,通过被动回避反应实验进行记忆行为学训练和测试,观察不同浓度的铅对小鼠记忆的影响。主要观察指标:①不同浓度铅暴露对发育期小鼠大脑组织内PKC活性的影响。②不同浓度铅暴露对发育期小鼠记忆行为的影响。结果:对幼鼠脑PKC的活性测定显示:在发育初期铅暴露小鼠脑中PKC活性高于正常,发育后期则低于正常,高浓度铅对PKC活性抑制较强;记忆行为学测试可见低浓度铅使小鼠发育初期记忆曲线升高,而使中长期记忆曲线减低;铅浓度升高,记忆曲线降低。

摘要：主要研究了含半夹心结构的新型金属框架化合物的合成、结构和性能。采用含有半夹心结构Cp*M的金属角(其中Cp*=η^5-C5Me5,M=Ir,Rh),是因为Cp*环可以屏蔽六配位金属中心的三个配位点,利用剩余的三个配位点可有目的地组装成有机金属框架化合物。含半夹心结构化合物的配位驱动自组装是高度可控的合成多组分系统的强大工具,设计合成具有特定结构的自组装化合物,同时研究它们独特的性质和功能,是近年来化学领域中最为热门的基础研究方向之一。