摘要：针对抗体胚系基因数据库的数据不断更新和完善,为获得人全部免疫球蛋白(Ig)重链可变区基因,改进引物设计方法,自主设计针对可变区基因高度保守的框架区1(FR1)和框架区4(FR4)的引物,提取未经免疫的健康人外周血单个核细胞,通过RT-PCR扩增重链可变区基因。其DNA序列与GenBank数据库和IMGT/V-QUEST软件比对,序列分析符合人免疫球蛋白重链基本框架结构,为胚系基因重排产生的序列。多个克隆的测序结果对比分析显示了良好的多样性。获得的重链序列为研制基因工程抗体及构建噬菌体抗体库奠定了物质基础,也为扩增其他物种Ig可变区基因的引物提供新的设计思路。

摘要：构建汉滩病毒G2糖蛋白的真核表达载体,并加入可增强小鼠免疫刺激作用的CpG基序,检测其可否在真核细胞中表达。参照Genebank中汉滩病毒M的全基因序列设计引物,引物两端引入可增强小鼠免疫刺激作用的CpG基序及双酶切位点,通过聚合酶链反应(PCR)获得含CpG基序的G2片段,并将其与T载体pMD18-T相连,测序后克隆至真核表达载体pcDNA3.1+上,将此真核表达载体以脂质体法转染至真核细胞Vero-E6中,利用间接免疫荧光法(IFA)检测发现转染后的Vero-E6中出现特异性的绿色荧光。结果表明本实验成功构建了汉滩病毒包膜糖蛋白G2的重组体。