摘要：为获取高活性的野生Bt菌株,对从土壤中分离的99株Bt菌株进行了营养期杀虫蛋白的分子鉴定和生物活性测定。根据已知的vip3 A基因序列设计1对特异性引物,进行PCR鉴定,55株扩增得到1.2 kb的目的片段。对31株阳性菌株的营养期杀虫蛋白活性进行了初步测定,结果显示,Bt LS1和LS8菌株毒力最高,2菌株对2龄甜菜夜蛾的体重抑制率分别为91.14%和93.59%。选取Bt LS1和LS8菌株进行胞内外营养期蛋白杀虫活性测定,发现Bt LS1和LS8菌株对初孵甜菜夜蛾体重抑制率分别为45.1%和43.2%,对初孵棉铃虫的校正死亡率分别为(22.1±1.4)%和(55.3±3.7)%,对2龄棉铃虫的体重抑制率分别为(78.7±6.6)%和(50.4±2.4)%。

摘要：从典型的马铃薯卷叶病毒病株中直接提取出植物总RNA ,根据PLRV外壳蛋白基因序列 ,设计合成了一对寡核苷酸引物 ,经RT -PCR法扩增出全长的cDNA片段 ,将其克隆到质粒pGEM - 3Zf (+)上 ,并进行了序列分析。结果表明 ,克隆的cDNA片段由 6 2 7个核苷酸组成 ,编码 2 0 8个氨基酸组成的理论分子量为2 3k的蛋白 ,与PLRV外壳蛋白的大小一致 ;此外克隆片段还含有一个不同于外壳蛋白基因的阅读框架 ,该框架由 46 5个核苷酸组成 ,编码 15 5个氨基酸组成的理论分子量为 17k的蛋白 ,与PLRV的 17k蛋白大小一致。与国外报道的几个株系相比 ,PLRV分离物的外壳蛋白基因及 17k蛋白基因的核苷酸同源率分别高达97 5 %～ 99 7%和 96 5 %～ 99 6 % ,由此推测的氨基酸同源率高达 97 6 %～ 99 5 %和 96 1%～ 99 4% ,说明所克隆的PLRV外壳蛋白基因和 17k蛋白基因具有高度的保守性 ,本研究克隆了PLRV分离物外壳蛋白和17k蛋白基因的序列 。

摘要：根据cry1Ib类基因的全长序列设计引物,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)GS8菌株的质粒DNA为模板扩增出片段长为2.16kb的cry1Ib全长基因,插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-21b,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,诱导表达出81.20kD的蛋白。推导的分子量为81.20kD,生物信息学分析表明其由719个氨基酸组成,氨基酸序列与Cry1Ib1蛋白的相似性为99.58%,不同于已知的10种Cry1Ib蛋白,是一种新的Cry1Ib蛋白,其基因已被国际基因命名委员会正式命名为cry1Ib3。杀虫活性测定结果表明:Cry1Ib3对小菜蛾(Plutella xylostella)有很强的杀虫活性,LC50为0.076 3μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、家蚕(Bombyx mori)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)和榆兰叶甲(Pyrrhalta aenescens)基本上没有活性。该基因的获得为我国抗虫转基因作物和工程菌的研制提供新的基因来源,亦为筛选延缓昆虫抗性产生的基因组合提供了重要依据。

摘要：根据已报道的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,建立了蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒IC-RT-PCR检测方法。用该方法对天津地区8个蝴蝶兰标样检测,结果显示:8个标样中有4个检测到建兰花叶病毒,另外4个检测到齿兰环斑病毒。该方法简化了操作程序,为蝴蝶兰种苗病毒的快速检测奠定了基础。

摘要：分析了苏云金芽孢杆菌(Bt)cry1和cry1Ⅰ基因的保守区,在cry1类基因的下游和cry1Ⅰ基因的上游设计了一对通用引物,用于检测cry1Ⅰ与cry1类基因的连锁现象,从鉴定的142株Bt分离株中,PCR扩增发现71株出现约1.4kb的阳性带,说明这一现象广泛存在于Bt菌株中,在此基础上用pGEM-T Easy载体克隆了菌株Bt07和J8中的连锁序列,序列分析表明,Bt07中是cry1Ⅰ基因与cry1Db基因连锁,间隔区为504bp;J8中是cry1Ⅰa基因与cry1Ac基因连锁,间隔区为506bp.进一步比较间隔区序列,同源性达93.7％,同时含有多个原核生物终止序列,且未发现启动子序列,揭示了这两个菌株中cry1Ⅰ基因沉默的成因。