摘要：目的：观察手足口病危重症患儿凝血系统状态与肺出血的关系，探讨临床凝血指标的早期诊断意义。方法采用前瞻性病例设计方法，选择2010年7月至2012年7月河北省儿童医院重症医学科收治的手足口病重型病例89例，按其严重程度分为重症组（46例）及危重症组（43例），将危重症组再按预后分为生存组26例和死亡组17例；健康对照组为同期44例同龄健康儿童。患儿入院后立即取血，进行血常规、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（Fg）及D-二聚体检测。结果重症组、危重症组和健康对照组PT、TT、APTT及Fg水平差异均无统计学意义（均P＞0.05），重症组和危重症组血小板计数（PLT）明显低于健康对照组（＆#215;109/L：245＆#177;130、237＆#177;156比389＆#177;120），D-二聚体明显高于健康对照组（mg/L：0.34＆#177;0.67、0.41＆#177;0.08比0.24＆#177;0.13），且危重症组D-二聚体高于重症组（均P＜0.05）。危重症组病死率为39.5%，存活组和死亡组PT、APTT、Fg、TT及PLT比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），而死亡组D-二聚体水平明显低于存活组（mg/L：0.60＆#177;0.09比0.12＆#177;0.09，P＜0.05）。结论重症及危重症手足口病凝血因子及血小板处于启动动员状态、轻度消耗状态，并存在纤溶抑制状态，尚未出现全身出血倾向，即处于弥散性血管内凝血（DIC）代偿期，不是肺出血的发生机制；监测D-二聚体对病情评估有临床意义。

摘要：目的探讨手足口病危重症患儿外周血白介素类细胞因子水平及肿瘤坏死因子在疾病发展过程中的变化。方法采用前瞻性病例设计,分为病例组(n=98)与对照组(n=50),对照组为同期同龄健康儿童。病例组为2013年2月至2013年11月重症医学科收治的手足口病重型病例,根据其严重程度分为:重症组(n=52)及危重症组(n=48)。患儿入院后立即取血,进行白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等指标检测。结果与对照组比较,重型组IL-6、IL-10和TNF-α明显升高(P0.05)。EV71阳性组(n=56)与病原学未检出组(n=42)比较,IL-4轻微升高,差异无统计学意义(P>0.05),IL-6、IL-10和TNF-α明显升高(P<0.05)。结论多种细胞因子参与了HFMD重症病例的发病和发展,产生严重的炎症和抗炎反应,EV71阳性患者具有更加明显的免疫反应。

摘要：目的构建蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素(α-8 giardin)特异性锤头状核酶-GCV重组载体。方法采用RNA draw软件对蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素基因序列(GenBank登录号为AY781323)的二级结构进行模拟分析,按照G∶C比例和锤头状核酶设计原则,选取合适的核酶切割靶点,设计特异性锤头状核酶(H8)序列,并将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,获得α-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体(pGCV634/H8/1423)。将载体线性化体外转录产物电击转染至贾第虫滋养体细胞内。提取转染后24 h的各组虫体总RNA,并以其为模板采用RT-PCR验证转染效果及对靶mRNA的切割效果。结果成功设计、合成了蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素mRNA锤头状核酶序列(H8),将其与犬贾第虫病毒载体(GCV)连接,成功构建了pGCV634/H8/1423;RT-PCR实验结果表明,重组载体pGCV634/H8/1423转染贾第虫细胞后24 h可检测到核酶RNA的存在,并实现了对α-8贾第素mRNA高效、特异的切割作用。结论构建的pGCV634/H8/1423能有效转染至贾第虫细胞内,并在其细胞内对α-8贾第素基因的mRNA具有高效、特异的切割作用。

摘要：目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建重组载体pGCV-PKH。将重组载体线性化体外转录产物,分别进行贾第虫细胞外、细胞内目的mRNA切割实验,采用荧光显微镜观察转染后24h的各组虫体。采用实时PCR对切割产物进行相对定量分析。结果构建了载有蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶的犬贾第虫病毒重组载体pGCV-PKH。细胞内切割实验结果表明,荧光显微镜下只有pGCV-GFP转染组虫体显示绿色荧光,pGCV-PKH转染组丙酮酸激酶mRNA的相对含量约为正常对照组的33.14%。细胞外切割实验结果表明,该组载体能在细胞外有效切割丙酮酸激酶mRNA,在设定条件下,其切割效率为58.5%。结论重组载体pGCV-PKH能有效转染蓝氏贾第鞭毛虫细胞,并能在其细胞内外对丙酮酸激酶mRNA进行有效切割。