摘要：根据锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）囊膜蛋白ORF27基因和糖蛋白ORF126基因序列设计特异性扩增引物,通过PCR成功克隆了锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）ORF27基因和ORF126基因片段,分别将ORF27基因、ORF126基因以及ORF126-ORF27融合基因与原核表达载体pMAL-c2x连接构建重组表达质粒pMAL-c2x-ORF126,pMAL-c2x-ORF27,pMAL-c2x-ORF126-ORF27,

摘要：根据NCBI中报道的造血器官坏死病病毒(IHNV)m基因序列设计特异性引物,提取病变组织中的RNA后,通过RT-PCR扩增得到m基因,大小约为570bp.与pET-22b连接,构建表达质粒pET-22b-m,转化大肠杆菌BL21(DE3)得到重组菌株BL21(DE3)(pET-22b-m).挑取阳性克隆子,IPTG诱导,经SDS-PAGE验证,在21.6ku处有目的蛋白表达;Western blot表明目的蛋白与相应抗体具有很好的反应性;免疫小鼠后,经ELISA测定血清中抗体效价,为1∶128 000;虹鳟鱼攻毒试验,发现重组菌株BL21(DE3)(pET-22b-m)表达的蛋白对虹鳟的最高保护率为68%.本试验结果为研制造血器官坏死病病毒基因工程疫苗奠定了坚实的基础.