摘要：为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside,6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA。采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行初步鉴定。用6-BAR-BSA以背部皮下多点注射的方式免疫4只BALB/c小鼠(编号1—4),免疫剂量50μg/只,间隔21 d,4免后10 d断尾采血制备鼠源多克隆抗体血清。间接ELISA测定血清效价,间接竞争ELISA测定血清敏感性及特异性。结果显示,6-BA人工抗原制备成功,免疫小鼠血清效价均达到1∶51200以上,2号小鼠血清效价最高为1∶204800,且其对6-BA的半数抑制浓度(IC50)为13.48μg/L,线性范围为0.26~701.45μg/L,与激动素、赤霉素、4-氯苯氧乙酸钠、腐霉利、呋喃苯烯酸钠、BSA、OVA交叉反应率均小于0.01%。综上,成功制备了6-BA人工抗原,并通过动物免疫得到高敏感性、高特异性鼠源多克隆抗体。

摘要：近年来,随着现代化猪舍的建设及养猪行业愈发一体化发展,通过猪场的科学设计及各种自动化、智能化的环境控制设备对猪舍环境进行控制的猪场大量涌现。这些猪场环境控制方式基本相同,但设计上的不合理之处则各不相同,从而使猪舍的环境控制效果大打折扣,进而影响猪的生产水平。该文对猪舍热环境控制及猪舍通风系统设计基础进行总结和梳理,供广大猪场建设者和养猪从业者参考。

摘要：参考GenBank发表的传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组序列,设计并合成了1对特异扩增IBDVVP2基因高变区的引物。应用RT-PCR法,对分离于新乡地区典型发病鸡群的IBDV(XX株)进行了VP2基因高变区的克隆与序列分析,并和相关毒株进行了比较。结果表明,XX株与超强毒株UK661,OKYM高度相似,核苷酸同源性分别为98.73%,99.15%,氨基酸同源性都为100%,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。

摘要：利用分子对接技术筛选出能识别乙型脑炎病毒E蛋白的高亲和性多肽序列。利用大肠杆菌原核表达系统表达乙型脑炎病毒E蛋白,并对其进行纯化。借助分子对接及虚拟肽库筛选技术设计多条针对E蛋白的多肽序列,通过酶联免疫吸附试验和表面等离子共振试验对多肽与靶标蛋白的结合情况进行筛选及鉴定。结果显示：成功表达E蛋白,并利用该蛋白筛选出了A、B两条特异性多肽序列,经检测,A、B多肽序列特异性和亲和性达到阳性血清水平。证明了利用分子对接技术设计的多肽可以与乙型脑炎病毒E蛋白特异性结合。

摘要：根据GenBank中的参考序列设计并合成引物序列，从pMDM13h中扩增带酶切住点和His—tag的基因序列；用HindⅢ和XhoⅠ双酶切PCR扩增产物和pcDNA3．0载体，连接构建真核表达重组质粒pc3M13h，利用PCR，双酶切和测序鉴定其正确性；重组质粒pc3M13h转染COS-7细胞，瞬时表达的转染细胞（96孔板）在转染36．48h后，应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学，分别检测pc3M13h在COS-7细胞培养上清液和细胞内的表达．结果表明，设计合成的引物成功扩增了带有酶切位点和His—tag的基因序列；成功构建了真核表达重组质粒pc3M13，双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学检测显示，pc3M13h重组质粒不但能够在COS-7细胞中进行表达，而且能够进行微量的分泌表达．

摘要：依据Gen Bank中注册的禽流感病毒(AIV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)基因组核苷酸序列,通过序列比对获得AIV、IBV、NDV、IBDV的相对保守序列。根据每种病毒的保守序列利用生物学软件分别设计3对特异性引物,4种病毒共设计12对引物,并对12对引物进行模拟筛选,获得匹配最佳的4对引物。对获得的最佳匹配引物进行单项PCR验证,优化复合PCR反应条件,确定最佳的退火温度、引物浓度和Taq DNA聚合酶使用量;经特异性、敏感性及简化PCR试验,最终建立了简易复合PCR检测方法。结果表明,建立的检测方法可同时扩增出4条大小与设计相符的特异性片段,即IBV(146 bp)、NDV(215 bp)、IBDV(345 bp)、AIV(435 bp);建立的复合PCR方法具有较强的敏感性和特异性,能检测出100 pg AIV、IBV、IBDV的cDNA和100 fgNDV的cDNA;将三温热循环改进为二温热循环,即将退火和延伸过程合为一步(62℃),大大缩短了反应时间。

摘要：依据猪伪狂犬病毒g B和g C蛋白的B细胞表位编码序列,分别设计g B和g C蛋白B细胞表位编码序列的融合扩增引物,利用融合PCR技术,将g B和g C蛋白B细胞表位编码序列有机地融合为g B-C表位编码序列。将融合基因片段插入到原核表达载体p ET28a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),1.0 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白g B-C能够高效表达,重组蛋白的分子质量约为38 ku;经Western blot鉴定分析,小鼠抗His标签单克隆抗体和PRV阳性血清均能识别表达的重组蛋白。表明成功表达了融合蛋白g B-C,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。

摘要：针对非洲猪瘟病毒B646L、MGF505-2R和CD2v基因分别设计了引物和探针,经过条件优化,建立了基于TaqMan探针技术的三重荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究建立的三重荧光定量PCR检测方法与猪场常见病毒的核酸不发生交叉反应,具有良好的特异性;敏感性分析显示,针对B646L、MGF505-2R和CD2v基因的最低检测下限分别为6.5,8.0和14.0 copies/μL;并且该方法在10~10copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,组间变异系数为0.05%~2.68%,组内变异系数为0.10%~1.17%,稳定性良好。进一步针对临床核酸样品的检测显示,本方法和OIE推荐的检测方法具有良好的一致性。本研究成功建立了非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的荧光定量PCR鉴别检测方法,为临床非洲猪瘟病毒的监测诊断提供了良好的技术支撑。

摘要：为了建立更灵敏的玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)快速检测方法,以量子点(quantum dots,QDs)为标记材料,利用活泼酯法标记ZEN单克隆抗体制备荧光免疫探针,以ZEN-BSA为检测线,成功制备了ZEN荧光免疫层析试纸。结果表明,该试纸回归方程为y=-0.5325x+0.9372,IC_(50)为6.6 ng/mL,检测限为1.2 ng/mL;与玉米赤霉酮(ZAN)交叉反应率为88.2%,与其他结构类似物交叉反应率均小于10%,与常见真菌毒素黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、T-2均无交叉反应;玉米样品加标回收率为86.4%~108.5%,变异系数小于15%;通过高效液相色谱(HPLC)法确证,本研究建立的荧光免疫层析试纸条可用于玉米中ZEN的快速筛查。

摘要：为制备猪瘟病毒(CSFV)特异性诊断抗原,根据国内CSFV流行毒株的序列合成了其主要的保护性抗原Erns蛋白的基因序列,将合成的基因按设计的酶切位点与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-Erns。用SalⅠ将重组表达质粒线性化后,转化GS115酵母菌。经筛选、鉴定,成功获得了表达CSFV的Erns蛋白的阳性重组酵母菌。该阳性重组酵母菌经甲醇诱导,在培养液上清中可检测到目的蛋白。Western-blot结果显示,该蛋白能特异识别CSFV抗体,且具有很好的反应原性。