摘要：为建立一种快速、特异、灵敏的A型塞尼卡病毒(SVA)检测方法,通过比对我国不同地区SVA流行毒株的VP1基因序列,在其保守区域设计了1组引物和探针,通过条件优化,建立了基于TaqMan探针的荧光定量RT-PCR检测方法。用该方法检测口蹄疫病毒、猪瘟病毒、日本脑炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒等均不发生交叉反应。敏感性分析显示,该方法的最低检出量为278拷贝/μL,比常规RT-PCR的灵敏度高100倍。重复性分析显示,所建立方法的批内变异系数为0.3%~1.0%,批间变异系数为0.8%~2.0%,具有良好的稳定性。进一步对16份疑似SVA感染的临床病料检进行了检测,结果显示8份为SVA核酸阳性。提示建立的检测方法可以用于临床SVA感染的鉴别诊断,为我国SVA的诊断和控制提供了良好的技术支撑。

摘要：为建立猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)快速、灵敏且特异的检测方法,针对PCV3全基因组的保守区域设计特异性引物,构建标准质粒,通过优化反应体系和反应程序,建立基于TB GreenⅡ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、重复性和可行性进行验证。结果显示,建立的TB GreenⅡqPCR检测方法特异性良好,在4.74×10^(2)~4.74×10^(7)拷贝/μL的标准质粒间具有良好的线性关系(R^(2)=0.999)。建立检测方法的最低检出限为10拷贝/μL,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,组内变异系数为0.33%~0.62%,组间变异系数为0.40%~0.73%。对收集的132份临床样品进行检测,PCV3 TB GreenⅡqPCR方法检出率为9.10%(12/132),高于PCV3常规PCR方法的检出率(4.55%,6/132)。综上,建立的PCV3 TB GreenⅡqPCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样品中PCV3感染的诊断、流行病学监测和实验室研究等。

摘要：目的探讨免疫层析试纸检测在即时检测中的研究现状及未来的发展方向和应用价值。方法参阅国内外发表的文献,综述免疫层析试纸在抗原、抗体、半抗原检测领域的应用及利用新纳米材料提高检测敏感度的设计策略。结果传统的免疫层析试纸主要以胶体金作为示踪物利用竞争法或夹心法对半抗原、抗原和抗体等进行检测,但存在敏感度不足及定量检测受限等问题,结合不同纳米材料进行新型试纸研发将有助于克服这些缺陷,向更高敏感性、定量、多联的检测方向发展。结论免疫层析试纸是进行即时检测和现场检测的重要工具,未来可用于对大规模群体实施检测,获取大数据,建立疾病或食品安全预警评价信息平台。

摘要：文章综述了"瘦肉精"的非法使用及其综合治理,介绍了"瘦肉精"的毒害作用和检测技术,从设计原理,定性、半定量、定量检测等方面详细阐述了免疫试纸快速检测技术及其在"瘦肉精"检测中的应用。

摘要：半抗原的设计与合成是免疫分析方法的关键。本文介绍了硫代磷酸酯类有机磷药物半抗原的设计路线与合成方法,总结了各种免疫分析方法(如酶联免疫法、偏振荧光免疫法、胶体金免疫层析法和免疫传感器)在硫代磷酸酯类有机磷药物残留检测中的应用,并对未来免疫分析法的发展方向进行了展望。

摘要：自上世纪美国哈佛商学院倡导案例教学法以来,该方法已广泛应用于多个学科领域。案例教学是将案例作为内容来源,鼓励学生参与课堂学习的一种教学方法。案例教学法在促进师生交流、激发学生学习兴趣、提高学生分析和解决问题能力等方面有明显的优势。新时代下,人才培养的要求及能力对课程教学提出了新的挑战。食品质量与安全控制专题是农业专业学位食品加工与安全领域的骨干课及必修课,学生在学习食品毒理学、食品质量管理、食品安全学、食品分析与检验、食品标准与法规等课程的基础上,通过具体的案例教学,可以达到“让研究生理解和掌握有关食品安全的原理、安全事件发生的规律和寻求解决方案”的教学目标。近年来,河南科技大学食品与生物工程学院为了提高研究生的培养质量,积极鼓励和组织食品加工与安全专业相关课程引入案例教学,希望在教学方法和效果方面取得新突破。本文主要对食品质量与安全控制专题课程中如何采用案例教学方法进行了设计与思考。

摘要：面对多种霉菌毒素的危害,依据本实验室建立的黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEA)和呕吐毒素(DON)联合导致的细胞毒性模型,通过复合益生菌、霉菌毒素降解酶及其配伍来降解这三种霉菌毒素。本研究首先选用拉丁方试验设计获得枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和丁酸梭菌的最佳组合,然后再与霉菌毒素降解酶配伍。结果表明:当枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和丁酸梭菌的活菌数皆为1×10^(5) cfu/mL时,对AFB1、ZEA和DON的联合降解效果最好。高含量霉菌毒素组AFB1、ZEA和DON的降解率分别为40.55%、56.05%和47.22%(P<0.05),低含量霉菌毒素组AFB1、ZEA和DON的降解率分别为43.05%、38.26%和80.49%(P<0.05)。复合益生菌与霉菌毒素降解酶的配伍试验结果表明,在高剂量霉菌毒素的降解试验中,单一复合益生菌、单一霉菌毒素降解酶及两者的配比为30:1时,对三种霉菌毒素的总降解率最高,分别到达了190.08%、175.10%和184.44%,显著高于其他组(P<0.05);在低剂量霉菌毒素的降解试验中,单一霉菌毒素降解酶对三种霉菌毒素的总降解率最高,达到了219.23%(P<0.05);其次为单一复合益生菌及两者的配伍比例为30:1和3:2时,对三种霉菌毒素的总降解率较高,分别达到了178.07%、181.84%和170.33%,显著高于其他组(P<0.05)。综上所述,复合益生菌、霉菌毒素降解酶及其两者适宜配伍,可同步降解AFB1、ZEA和DON三种霉菌毒素,为多种霉菌毒素的同步降解奠定了基础。

摘要：为了培养学生独立思考、分析问题和解决问题的能力,激发学生的学习兴趣,提高教学效果,就“食品质量与安全控制专题”课程案例教学方法的应用设计进行了探讨,并对典型案例进行分析,为更好地运用案例教学提供参考。

摘要：蓝舌病是一种侵害反刍动物的虫媒传染病,被世界动物卫生组织(Office International des Epizooties,OIE)列为上报疾病,我国将其列为一类动物疫病。本研究利用计算机软件分析获取蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)核酸检测的保守靶序列,设计引物和TaqMan荧光探针,建立了BTV荧光定量RT-PCR技术,进行了特异性、敏感性、重复性等实验评价,并对动物样品进行检验。结果显示,该技术可有效检出不同血清型BTV,与流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)无交叉反应;对RNA标准品的检测灵敏度为102copies;重复检测CV<5%,可对动物样品进行有效检测。因此,所建立的BTV TaqMan/荧光定量RT-PCR技术可为蓝舌病诊断提供一种快速、可靠的病原检测手段。

摘要：为制备稳定性好、免疫反应性佳的核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N),设计表达二聚体N蛋白(N-dimer),并基于该蛋白质建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体间接酶联免疫吸附试验(Indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)检测方法。首先选取当前PRRSV国内优势毒株NADC30-like N蛋白基因序列,通过(GGGGS)3linker将N蛋白基因序列串联,经密码子优化合成后构建N-dimer重组表达载体。利用原核表达系统进行诱导表达,并通过镍离子螯合亲和层析法进行纯化。Western-blot分析其与PRRSV阳性和阴性血清的反应性;冻融法比较N-dimer与单体N蛋白(N-monomer)的沉淀析出情况;ELISA法比较N-dimer与N-monomer的免疫反应性。以N-dimer作为包被抗原建立PRRSV抗体iELISA检测方法,对该方法的反应条件进行优化,验证其特异性、敏感性、重复性,并应用于临床血清样品检测。结果表明,在16℃、0.2 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷条件下诱导16 h,N-dimer获得大量可溶性表达。Western-blot结果表明,N-dimer能够与PRRSV阳性血清发生特异性反应;相较于N-monomer,N-dimer能够稳定保存,并且免疫反应性更佳。成功建立了基于N-dimer的PRRSV抗体iELISA检测方法,且该方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性;与商业试剂盒结果进行比较,其阳性符合率为96.88%,总符合率为96.86%,符合率高。综上,成功制备了稳定性好、免疫反应性佳的N-dimer,并基于N-dimer建立了PRRSV抗体iELISA检测方法。