摘要：GATA-1(GATA binding protein-1)在造血分化过程是最重要的转录调控因子,在红细胞和巨核细胞中特异性高表达,并通过调节相关基因的转录在红系和巨核系造血细胞的分化发育过程中发挥重要作用。该研究采用CRISPR/Cas9技术将K562细胞中的GATA-1基因敲除,建立了GATA-1基因敲除K562细胞株。首先,设计了4个CRISPR的靶向位点,利用p GL3-U6-sg RNA-PGKpuromycin质粒构建了4个导向RNA(single guide RNA,sg RNA)载体。利用电穿孔的方法将sg RNA载体与Cas9载体p ST1374-NLS-fl ag-linker-Cas9共转K562细胞。转染48 h,经定点PCR和T7EN1内切酶酶切鉴定后,采用细胞有限稀释法嘌呤霉素筛选,定点测序和Western blot检测结果显示,成功构建了GATA-1基因敲除K562细胞株,命名为K562-KO GATA-1。使用联苯胺染色和流式细胞术的方法检测血型糖蛋白A(glycophorin A,CD235a)发现,与正常K562细胞相比,K562-KO GATA-1细胞株经Hemin诱导红系分化明显受到抑制。综上,该研究建立了敲除GATA-1的K562细胞系,可用于后续的造血分化相关研究。

摘要：嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)疗法因其强大的治疗潜能及临床试验的确切疗效,已经成为肿瘤免疫治疗的重要手段之一。虽然CAR-T疗法在血液系统肿瘤的治疗中取得了突破性进展,但在实体肿瘤中的治疗效果不太理想,同时伴随着细胞因子风暴、脱靶效应等风险。CAR-T疗法的改良策略有通过引入自杀基因系统、CAR-T激活信号控制系统、限制剂量等来提高安全性;增强CAR-T的归巢、增殖存活能力、突破免疫抑制微环境等来增强有效性。本文从CAR结构设计及CAR-T疗法的安全性、有效性改良策略方面展开综述。