摘要：进化是生物多样性产生和保留的自然进程。通过对编码蛋白质的基因进行有目的地设计和改造,获得性能更优异的蛋白质用于生产生活,是蛋白质工程的目的所在。为了在实验室中通过定向进化的蛋白质工程模拟自然进化的实现过程,研究人员通过在快速增殖的原核生物和简单的真核生物中引入靶向诱变元件,建立了各种体内连续进化系统。本综述介绍了体内连续进化平台的现状,重点关注噬菌体和酵母中人工进化技术的研究进展,并对其在生物技术领域中的成功应用进行了总结,最后简要展望了体内连续进化这一新兴领域的发展方向。

摘要：依据邻羟基二苯醚及芳香肼类化合物的抗菌特性,以邻羟苯基为分子核心,酰肼键为桥基,设计合成了7种未见报道的N-(取代苯基)乙基-2-羟基苯甲酰肼类化合物.以水杨酸甲酯为原料,经肼解反应后与取代苯乙酮缩合,再与硼氢化钠反应制得目标化合物,化合物结构经IR,1H NMR和元素分析等证实.抗菌活性测试结果表明,该类化合物对不同菌株的抑菌活性具有明显的选择性和特异性.当质量浓度为1×10-4g/mL时,化合物3b和3e对大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌率高达100%,有极强的抑菌活性;所有化合物对金黄色葡萄球菌的抑菌率均大于70%,有一定的抑菌活性.构效关系分析结果表明,苯基中引入Cl或Br等卤原子能显著增强化合物的抑菌活性,而引入—NO2及—CH3基团则会降低其抑菌活性.

摘要：目的制备鱼腥草挥发油羟丙基-β-环糊精(HPCD)包合物肠用温敏凝胶。方法冷溶法制备凝胶,以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188用量为影响因素,相变温度为评价指标,星点设计-效应面法优化处方。以甲基正壬酮为指标成分,无膜溶出法和透析袋法分别考察凝胶溶出率与体外释放率,再通过高温(40、60℃)、低温(4℃)、强光[(4 500±500)lx]、加速(3个月)试验评价其稳定性。结果最佳条件为P407用量20.61%,P188用量3.03%,相变温度36.5℃。在30~150 min时,HPCD包合物凝胶累积溶出率高于挥发油凝胶,在150~210 min时趋于一致,但前者累积释放率(0~50 h)一直高于后者。所得凝胶在低温下稳定性良好;高温、强光、加速下其外观、性状(高温除外)、p H均较稳定,但甲基正壬酮含有量明显降低。结论鱼腥草挥发油HPCD包合物肠用温敏凝胶应在低温(4℃)下保存。

摘要：目的制备并评价鱼腥草挥发油纳米结构脂质载体。方法采用熔融乳化-超声分散法,在单因素考察的基础上利用正交实验设计,优化了制剂处方及制备工艺。采用气相色谱法,建立了纳米结构脂质载体中鱼腥草挥发油的定量测定方法,并从外观、形态、粒径分布、包封率、载药量及短期稳定性等方面对制剂进行评价。结果最佳处方为单硬脂酸甘油酯0.12 g,辛酸癸酸三甘油酯0.08 g,泊洛沙姆188 0.533 g,蛋黄卵磷脂0.267 g,鱼腥草挥发油0.1 g,重蒸馏水加至20 mL;最佳工艺为初乳搅拌20 min,超声分散10 min,超声振幅100%。所制备的纳米粒平均粒径约为(70.76±1.74)nm,Zeta电位为(-25.40±1.08)mV,包封率90.33%,载药量5.76%。结论所制备的鱼腥草挥发油纳米结构脂质载体粒径小,包封率高,物理稳定性较好。

摘要：目的制备鞣花酸纳米混悬剂(ellagic acid nanosuspensions,EA-NPs),并考察在SD大鼠体内的药动学特征。方法采用高压均质法制备EA-NPs。在单因素实验基础上,以稳定剂与药物用量比例、均质压力、均质次数为主要影响因素,粒径和多分散系数(polydispersity index,PDI)为考察指标,采用Box-Behnken设计-效应面法优化EA-NPs制备工艺。采用透射电子显微镜(TEM)和X射线粉末衍射(XRPD)对EA-NPs进行表征,透析袋法考察体外释药情况。SD大鼠分别ig给予鞣花酸混悬液、物理混合物(比例同EA-NPs)和EA-NPs,HPLC法测定大鼠血浆中的鞣花酸质量浓度,并计算主要药动学参数。结果EA-NPs的最处方工艺:以磷脂-聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone,PVP)K30(2∶3)为稳定剂,稳定剂与药物比例4∶1,制备温度为25℃,均质压力73 MPa,均质次数为11次。EA-NPs呈球形或类球形,粒径为70~400 nm,平均粒径为(148.16±7.61)nm,PDI为0.089±0.014,ζ电位为(-29.64±1.82)m V。鞣花酸在EA-NPs中以无定形状态存在,6 h内药物的累积释放率为96.24%。药动学结果显示,EA-NPs的半衰期(t1/2)延长至(3.17±0.64)h,达峰浓度(Cmax)提高至(1172.04±182.51)ng/mL,相对口服生物利用度提高至5.61倍。结论EA-NPs可促进药物体外溶出,提高鞣花酸在大鼠体内的口服生物利用度。

摘要：目的:考察不同因素对蒲公英随机扩增多态性DNA反应体系的影响,建立并优化反应体系。方法:正交设计及综合评分法应用于建立RAPD-PCR反应体系的研究。结果:蒲公英药材RAPD-PCR最佳反应体系为25μL反应体系中含1×GC buffer、2.5 mmol/L Mg2+、1.25 U Taq酶、0.4μmol/L引物、0.4 mmol/L dNTP Mixture、50 ng模板DNA。结论:该反应体系具有良好的稳定性和重复性,为进一步研究蒲公英药材遗传多样性奠定了坚实的基础。

摘要：目的:提出非虚假设综合渐近正态法。方法:将渐近正态法加以扩展以覆盖非虚假设和分层设计,从而推导出单样本和两样本基本关系式,功效函数,样本量,及检验统计量。结果:当最小感知差别取零时,它还原对应经典方法,包括经典Cochran检验和Mantel-Haenszel检验。当层数取1时,它还原为非虚假设渐近正态法,包括Dunnett-Gent检验。当最小感知差别取零且层数取1时,它还原为经典渐近正态法,包括单样本和两样本比例检验。结论:这种方法可用于分层设计的有效对照临床试验,以建立临床优效性,非劣效性,或等效性。

摘要：目的研究水蒸气蒸馏法提取干品鱼腥草挥发油的最佳工艺条件。方法以挥发油提取率为评价指标,采用单因素考察和正交试验设计,考察粉碎度、浸泡时间、料液比和回流时间对挥发油提取率的影响。结果水蒸汽蒸馏提取干品鱼腥草挥发油的最佳工艺条件为药材粉碎至粗粉,料液比1∶10(g/g),浸泡10h,加热回流10h。结论最佳提取工艺提取率较高、重现性良好,具有实际应用价值。

摘要：[目的]对艾附暖宫软胶囊制备工艺进行优选。[方法]以流动性、均匀性和沉降体积比为考察指标,在单因素实验基础上,利用响应面软件Box-Behnken设计模型确定内容物的最佳工艺处方;以胶皮韧性和胶液黏性为指标,优化软胶囊囊皮处方;考察制备工艺,确定工艺参数。[结果]确定大豆油为分散介质,浸膏粉、大豆油、蜂蜡比例为1∶2.2∶6.25%,膏粉粒度为120目,制得的内容物混悬效果最好,以明胶、甘油、水比例为1∶0.4∶1的比例制备的囊皮效果最佳,胶盒温度50～60℃、喷体温度35～37℃,制冷温度为16～18℃,胶囊成形率和得率最高。[结论]优选的制备工艺合理,制剂稳定。

摘要：目的构建酮戊二酸脱氢酶(OGDH)基因敲除SD大鼠模型。方法设计、构建TALEN重组子,用荧光素酶活性法筛选出最有效重组子,显微注射法将质粒打入受精卵后测序鉴定。对同一时间点的野生型和基因敲除型大鼠分别进行饮食习惯、活动状态、毛发颜色及质量检测,Western Blot检测两者肝组织OGDH蛋白表达。结果成功构建了靶向OGDH基因的TALEN质粒,并筛选了最有效的TALEN重组子(OGDH-T2),成功培育出杂合子18只,成功率为22.5%,未发现OGDH-KO8纯合子的出生。质量检测显示OGDH-KO8大鼠的质量明显高于野生型,且在第10周时最为显著,增幅率达50.2%(P<0.001),KO组大鼠的OGDH蛋白表达水平显著降低,下降率为50.6%(P<0.01)。结论利用TALEN技术成功构建了OGDH基因敲除型SD大鼠模型。