摘要：为了建立快速、简便的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)PCR检测方法,试验根据Gen Bank上已发表的单增李斯特菌iap基因序列,设计1对特异性引物,通过优化各种条件建立针对iap基因的单增李斯特菌的PCR检测方法,并对该方法的灵敏度和特异性进行评估及初步临床应用。结果表明:建立的PCR检测方法的最佳退火温度为60℃,Mix最佳使用量为12.5μL,模板使用量为30 ng;该方法对单增李斯特菌纯培养物的检测限为1×105cfu/m L,且能够区分单增李斯特菌和英诺克李斯特菌,对沙门氏菌、大肠杆菌及猪链球菌均无交叉反应;对42份疑似感染单增李斯特菌临床样品进行PCR检测,有7份扩增结果呈阳性,与传统分离培养结果一致。说明试验所建立的PCR方法可用于食品中单增李斯特菌的检测。

摘要：根据GenBank公布的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列,设计合成1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vv IBDV)洛阳分离株LY1的VP2基因并进行克隆,构建重组质粒p MD18-T-VP2,然后连接至原核表达载体p ET32a,将阳性质粒转化至感受态细胞Rosetta中进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示VP2基因在大肠杆菌Rosetta细胞中实现融合表达,蛋白大小约66 ku,且主要存在于细胞上清中,Western blot试验证实表达的VP2蛋白具有较好的反应原性。研究结果可为IBDV的诊断抗原及基因工程疫苗研究奠定基础。

摘要：本研究旨在分离鉴定河南鸡群马立克病病毒（Marek’s disease virus，MDv）流行毒株，了解当前MDV分子进化特征并为鸡马立克病（MD）的有效防控提供参考。根据MDV基因组设计了meq、gE、gI、gB、pp38以及132～bp重复序列基因的特异性引物，应用PCR扩增和DNA测序分析对河南焦作土鸡群8份MD疑似病例进行了确诊，并通过鸡胚成纤维细胞（CEF）盲传培养和间接免疫荧光试验（IFA）分离鉴定了3个流行毒株，分别命名为HNJZ101、HNJZ102和HNJZ103。结果显示，3个MDV分离株均为血清1型（MDV1）毒株，未发生禽网状内皮增生症病毒（REV）共感染，并且132-bp重复序列基因均为双拷贝。meq、gE和gI基因核苷酸序列比对分析发现，临床病例样本及3个MDV新分离株的meq基因与国内外温和毒或疫苗毒株的meq基因核苷酸序列同源性仅为64．7％～78．8％，但与MDV强毒株的同源性高达98．9％～100．0％；gE和gJ基因的核苷酸序列同源性均较高，分别为99．1％～99．9％和99．3％～100．0％。系统发生树分析结果表明，HNJZ101、HNJZ102和HNJZ103与绝大多数此前分离的河南毒株及国内MDV强毒株同处于一个大的进化分支。研究结果表明，3个分离株HNJZ101、HNJZ102和HNJZ103很可能是当前河南土鸡群中流行的致病性MDV—1毒株，其确切的致病型及导致免疫失败的原因仍有待进一步深入研究。