摘要：[目的]利用PCR法(链式聚合酶反应)制备17号染色体的绿色荧光计数探针。[方法]首先通过对人类基因组17号染色体着丝粒序列分析,找出其特异性的重复序列,设计引物,通过PCR法制备绿色荧光探针,然后利用荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)实验检验所制备17号染色体计数探针质量。[结果]FISH实验结果显示,利用PCR法制备的计数探针荧光信号清晰可辨。[结论]PCR法可良好地应用于17号染色体计数探针(Chromosome 17 enumeration probe,Cep17)的制备,制备的探针可用于相关疾病的检测。

摘要：为制备程序性细胞死亡配体1胞外区多肽及其鼠源性多克隆抗体,根据UniProtKB数据库中公布的其胞外区基因序列(标识符:Q9NZQ7-1)和原核表达载体pET-28a(+)Nde I上游和Xho I位点下游的序列,设计合成带有同源臂的特异性引物.以合成的PD-L1胞外区基因为模板,PCR扩增程序性细胞死亡配体1胞外区基因并将其克隆至pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)-PD-L1-E,转化至大肠杆菌DH5α中,扩增并提取其质粒,然后将质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.亲和层析镍柱纯化重组蛋白后,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定,确认表达蛋白正确.浓缩换液后用重组蛋白免疫Balb/c品系小鼠制备多克隆抗体,经ELISA检测,成功获得抗程序性细胞死亡配体1胞外区血清.该研究对于研发某些肿瘤伴随诊断检测试剂有重要意义.

摘要：目的通过荧光原位杂交（FISH）方法检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者间变性淋巴瘤激酶（ALK）基因重排。方法根据ALK断裂重排方式及特点，设计并制备红／绿双色荧光探针。以人外周血培养细胞为检测对象评价ALK融合基因检测探针的敏感性和特异性，以NSCLC石蜡组织样本为对象进行ALK基因重排检测以评价探针的性能。结果本研究制备的荧光探针在EB病毒（EBV）转化的人淋巴细胞检测中的特异性和敏感性均可达到100％。在对2例NSCLC患者石蜡包埋组织样本检测中，检测阴性、阳性各1例，检测结果与免疫组织化学检测结果一致。结论本研究中制备的双色荧光探针可用于NSCLCALK基因重排的检测。