摘要：背景:反转录聚合酶链反应用于基因表达分析越来越显示出其重要性,其中合适的内参基因选择很重要,目前并没有适合于所有体系可作为内参的管家基因。大鼠是常用动物模型,选择合适的大鼠管家基因作为内参尤其必要。目的:比较分析使用最广泛的4个标准管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中的表达情况。设计、时间及地点:观察对比实验,于2007-07/08在泰山医学院生命科学研究所分子生物学实验室及泰安市疾控中心病毒检测中心实验室完成。材料:选用老年SD大鼠3只,用于检测管家基因表达情况。方法:采用反转录实时荧光聚合酶链反应技术检测老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中有着不同表达丰度和功能的4个管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA的表达情况。主要观察指标:老年大鼠不同组织内4个管家基因的表达水平及不同组织间的表达差异。结果:①酸性核糖体磷蛋白P0在老年大鼠不同组织间表达差异最小。②老年大鼠肾组织中表达最稳定的管家基因是β-肌动蛋白;心脏组织和肺组织中表达最稳定的管家基因是3-磷酸甘油醛脱氢酶。结论:老年大鼠组织间信使RNA分析仅用1个内参基因是不合适的,至少应该使用两个参照基因,1个选用18S核糖体RNA;另一个基因的选择标准如下:适用于分析不同组织间基因表达情况的内参基因是酸性核糖体磷蛋白P0,而心脏和肺组织研究适用3-磷酸甘油醛脱氢酶,肾组织研究适用β-肌动蛋白。

摘要：背景:胰岛素抵抗是代谢综合征、糖尿病和动脉粥样硬化的共同病理基础。目的:比较相同体质量不同饮食诱导及不同体质量相同饮食诱导建立胰岛素抵抗大鼠模型的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-10/2007-09在泰山医学院生命科学研究所完成。材料:SPF级1个月龄雄性SD大鼠20只;胰岛素溶液为江苏万邦生化医药股份有限公司产品,按照4mU/(kg·min)的滴速标准用前临时配制。方法:按体质量分组4组:体质量在(140±10)g范围的为普通饲料组、高盐高脂饲料组、高糖高脂饲料组,体质量在(180±10)g范围为高糖高脂饲料组,每组5只。主要观察指标:用高脂饮食诱导建立胰岛素抵抗模型;用正常葡萄糖-高胰岛素钳夹试验验证是否有胰岛素抵抗;不同体质量、不同饮食配方与胰岛素抵抗模型的关系。结果:轻体质量和重体质量大鼠在基础血糖、基础血压方面差异无显著性,20只大鼠全部进入结果分析。①高脂喂养4个月后,两组大鼠体质量、肾脏和附睾周围脂肪重量及GIR60-120差异已无显著性意义,血压差异有显著性意义(P<0.05),Ln(FINS)、Ln(SINS)差异有极显著性意义(P<0.01)。②体质量(140±10)g大鼠经高脂喂养4个月后,高脂喂养组与普通饲料组体质量差异无显著性意义。肾脏周围脂肪重量、喂养后血压、Ln(FINS)、Ln(SINS)及GIR60-120差异都有极显著性意义(P<0.01);高脂高糖及高脂高盐喂养大鼠除Ln(SINS)差异有极显著性意义外,其他指标之间差异无显著性意义。结论:基础体质量较低的大鼠易出现胰岛素抵抗,高脂饮食能更易成功诱导低体质量大鼠胰岛素抵抗模型,在高脂喂养中,饲料中的高糖与高盐对胰岛素抵抗生成影响的差别不大。

摘要：目的构建含报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体pSecTag-EGFP,用以研究pSecTag/HygroB转染鸡胚胎成纤维细胞的转染效率,为目的基因的成功表达奠定基础。方法用PCR方法克隆得到EGFP基因,通过酶切、连接、转化构建pSecTag-EGFP分泌型真核表达载体,设计优化实验,通过脂质体介导的方法转染鸡胚胎成纤维细胞,在荧光显微镜下直接观察该基因的表达。用B radford法检测不同组合的细胞培养液中的EGFP蛋白的相对含量。结果脂质体介导的方法能有效转染鸡胚胎成纤维细胞,实验中EGFP蛋白相对表达量随质粒量的增加而明显升高(P<0.01)。其中脂质体2μl、质粒1.0μg时目的蛋白相对表达量最高。结论pSecTag-EGFP质粒构建成功,并成功优化了转染条件。

摘要：目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T及A1298C多态性与饮酒间交互作用对食管癌发病的意义。方法以新诊断的食管癌患者为研究对象,采用病例-对照研究设计,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法（PCR-RFLP）检测MTHFR基因C677T及A1298C多态基因型,运用相乘模型分析MTHFR基因C677T及A1298C多态性与饮酒交互作用对食管癌发病的影响。结果MTHFR基因C677T多态基因型与饮酒指数间存在次相乘模型的交互作用,OR为10.892（2.461-65.927）;MTHFR基因A1298C多态基因型与饮酒指数间存在超相乘模型的交互作用,OR为8.339（1.131-61.459）。结论MTHFR基因C677T及A1298C多态基因型可增加过量饮酒者食管癌的患病危险性。